補腎調(diào)經(jīng)湯對PCOS模型大鼠血清AMH水平及卵巢AMHRⅡ表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　觀察補腎調(diào)經(jīng)湯對多囊卵巢綜合征（PCOS）模型大鼠動情周期、血清抗苗勒氏管激素（AMH）水平、卵巢組織形態(tài)學(xué)及卵巢組織中抗苗勒氏管激素二型受體（AMHRⅡ）表達(dá)的影響，探討PCOS的發(fā)病機制及補腎調(diào)經(jīng)湯治療作用機理。
　　方法：
　　將70日齡左右(平均體重270.56±2.13g）的SPF級SD雌性大鼠48只，隨機分為實驗組36只和正常對照組12只（實驗組:正常對照組為3:1），用Poretsky造模法對

2、實驗組大鼠皮下注射胰島素（INS）和人絨毛膜促性腺激素（HCG），同時用5％葡萄糖溶液灌胃，構(gòu)建PCOS大鼠模型。造模完成后，隨機抽取實驗組中大鼠6只和正常對照組中大鼠2只（實驗組:正常對照組為3:1），行陰道脫落細(xì)胞涂片，測定血清雄烯二酮（ASD）、促黃體生成素（LH）水平，測量一側(cè)卵巢重量及長徑，并觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)，根據(jù)檢測結(jié)果判定造模是否成功。再將實驗組大鼠按每組各10只的數(shù)量隨機分為3組：模型空白對照組、中藥組、西藥組。其后中

3、藥組大鼠用補腎調(diào)經(jīng)湯灌胃處理；西藥組大鼠用炔雌醇環(huán)丙孕酮藥液灌胃處理；正常對照組和模型空白對照組大鼠用生理鹽水灌胃處理。給藥4天為一療程，每4天停1天，共15天（3個療程）后，光鏡下觀察各組大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片連續(xù)10天，處死大鼠，采用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測各組大鼠血清AMH水平，觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)變化，同時應(yīng)用Western Blot法檢測大鼠卵巢組織中AMHRⅡ的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1．判定造模成功：正常對照組

4、大鼠精神、攝食、活動等一般情況均較好，對外界刺激反應(yīng)敏捷。而實驗組大鼠皮下注射INS和HCG造模22天后，均表現(xiàn)為體態(tài)肥胖，行動較為遲緩，倦怠嗜睡，活動少，毛色灰暗無光澤，且偶有脫毛等。隨機抽取實驗組中大鼠6只，正常對照組中大鼠2只（實驗組:正常對照組為3:1）。
　?。?）大鼠陰道脫落細(xì)胞檢查結(jié)果：正常對照組大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片均可見規(guī)律的動情周期；實驗組大鼠陰道脫落細(xì)胞涂片均提示不規(guī)則的動情周期，可見動情周期紊亂，延長或停滯。

5、
　　（2）ELISA法測定大鼠血清中雄烯二酮（ASD）、促黃體生成素（LH）水平，結(jié)果顯示：實驗組大鼠較正常對照組大鼠血清ASD、LH水平升高。
　?。?）一側(cè)卵巢重量及長徑比較，結(jié)果顯示：實驗組大鼠較正常對照組大鼠卵巢重量重，卵巢長徑長。
　?。?）HE染色切片，觀察卵巢組織形態(tài)學(xué)，結(jié)果示：正常對照組大鼠卵巢鏡下可見發(fā)育各期卵泡及一定數(shù)量的黃體組織，皮髓質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)較清晰，多數(shù)生長卵泡細(xì)胞較大，結(jié)構(gòu)正常，卵泡液含量多

6、，顆粒細(xì)胞層次較多，黃體體積較大，間質(zhì)無炎細(xì)胞浸潤及纖維化。實驗組大鼠卵巢鏡下均見有較多數(shù)量的囊狀擴張卵泡，卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞層數(shù)顯著減少甚至消失,不見卵母細(xì)胞及放射冠,黃體和發(fā)育各階段的卵泡數(shù)量顯著減少,卵泡膜細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞可見增生，提示卵泡發(fā)育異常及排卵障礙。
　　根據(jù)以上結(jié)果，判定為實驗組大鼠造模成功。
　　2．用藥干預(yù)后大鼠陰道脫落細(xì)胞檢查結(jié)果：西藥組和中藥組經(jīng)藥物干預(yù)處理后，大鼠紊亂的動情周期有所改善，主要體現(xiàn)在動情周

7、期、動情間期逐步恢復(fù)，趨于正常；而模型空白對照組仍表現(xiàn)為不規(guī)則的動情周期，可見動情周期紊亂，延長或停滯。
　　3．用藥干預(yù)后大鼠卵巢組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)：用藥干預(yù)后，西藥組和中藥組大鼠卵巢鏡下可見差異發(fā)育的卵泡及較多數(shù)量的黃體，卵泡內(nèi)多層顆粒細(xì)胞，提示卵泡發(fā)育及排卵狀況逐漸恢復(fù)正常；而模型空白對照組仍表現(xiàn)為卵泡發(fā)育異常及排卵障礙。
　　4．用藥干預(yù)后大鼠血清AMH水平檢測：模型空白對照組大鼠血清AMH水平較正常對照組顯著升高，差異

8、明顯（P＜0.05）；與模型空白對照組相比，西藥組和中藥組大鼠血清AMH水平均有下降趨勢，差異并不明顯（p﹥0.05）。
　　5．用藥干預(yù)后大鼠卵巢組織中AMHRⅡ的表達(dá)：模型空白對照組大鼠卵巢AMHRⅡ表達(dá)明顯高于正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；與模型空白對照組相比，西藥組和中藥組大鼠卵巢 AMHRⅡ表達(dá)均顯著降低，差異明顯（P＜0.05）；中藥組大鼠卵巢AMHRⅡ表達(dá)低于西藥組，差異不顯著（p﹥0.05）。<

9、br>　　結(jié)論：
　　1．運用Poretsky造模法皮下注射INS和HCG可以成功建立PCOS大鼠模型；
　　2．補腎調(diào)經(jīng)湯和炔雌醇環(huán)丙孕酮均有降低PCOS模型大鼠血清AMH水平的作用趨勢；
　　3．補腎調(diào)經(jīng)湯和炔雌醇環(huán)丙孕酮均能下調(diào)PCOS模型大鼠卵巢組織中AMHRⅡ的表達(dá)；
　　4．PCOS的發(fā)病機制可能與AMH信號傳導(dǎo)有關(guān)，補腎調(diào)經(jīng)湯可能通過此環(huán)節(jié)，有效改善 PCOS模型大鼠卵巢組織原始卵泡的發(fā)育及排卵狀況