MicroRNA在PCOS大鼠模型卵巢中的表達(dá).pdf

1、第一部分:構(gòu)建PCOS 大鼠模型及檢測PCOS 大鼠卵巢microRNA (miRNA)的表達(dá)譜
　　 目的：1、構(gòu)建脫氫表雄酮(DHEA)誘導(dǎo)幼年雌性Wistar 大鼠多囊卵巢綜合癥(PCOS)模型，并分析其胰島素抵抗特征。
　　 2、微陣列芯片檢測正常大鼠和PCOS 大鼠的卵巢組織miRNA表達(dá)譜，分析兩組大鼠卵巢組織miRNA表達(dá)譜的差異。
　　 方法：1、選取21日齡斷奶的Wistar 大鼠40只，隨機分

2、組為模型組和對照組，各20只，皮下注射DHEA 建立大鼠PCOS模型：DHEA6mg/100g+0.2ml注射用油劑×20天，對照組于同時間皮下注射無菌注射用油劑。采用以下方法驗證模型：顯微鏡下觀察陰道涂片判斷大鼠所處動情周期的時相；全自動化學(xué)發(fā)光檢測儀測定血清睪酮(T)、雌二醇(E2)、黃體生成素(LH)；放射免疫學(xué)方法測定空腹血清胰島素(FINS)，血糖儀測定空腹血糖(FBG)，并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA1-IR)；測定大鼠體重

3、和卵巢重量；卵巢組織切片，HE 染色，并觀察其形態(tài)學(xué)變化。
　　 2、取出大鼠雙側(cè)卵巢，并行心臟采血，留取血清。微陣列芯片檢測兩組大鼠卵巢組織中miRNA的表達(dá)譜，比較分析兩組大鼠miRNA表達(dá)譜的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、PCOS模型組大鼠失去正常的動情周期，而對照組大鼠具有規(guī)律的動情周期。與對照組比較，PCOS模型組T、FBG、FINS、HOMA1-IR 顯著升高(分別均P<0.01)，PCOS模型組大

4、鼠體重?zé)o顯著改變，去除體重影響后PCOS模型組大鼠卵巢重量顯著大于對照組(P<0.05)。卵巢切片HE 染色顯示：PCOS模型組卵巢有較多不規(guī)則的卵泡呈囊狀擴張，發(fā)育階段卵泡及黃體數(shù)目明顯減少，顆粒細(xì)胞層數(shù)減少甚至消失。對照組可見不同發(fā)育階段的卵泡及多個黃體。
　　 2、與對照組比較，PCOS 大鼠卵巢組織中表達(dá)存在顯著差異的miRNA有48個，22個表達(dá)上調(diào)，包括miR-320、miR-296、miR-323*、miR-330

5、和miR-145等；26個表達(dá)下調(diào)，包括miR-21、miR-10b、miR-290、miR-352和miR-146b等。
　　 結(jié)論：
　　 1、DHEA 誘導(dǎo)幼年雌性Wistar 大鼠PCOS模型的卵巢病理改變及血內(nèi)分泌改變與PCOS 病人相似，并存在胰島素抵抗現(xiàn)象。
　　 2、兩組大鼠卵巢組織miRNA表達(dá)譜存在顯著差異，表達(dá)存在顯著差異的miRNA 可能參與PCOS的發(fā)病過程。
　　 第二部分：M

6、iR-21和miR-320在大鼠卵巢中的表達(dá)及其在PCOS 發(fā)病機制中的可能作用
　　 目的：1、檢測miR-21和miR-320在PCOS模型組和對照組大鼠卵巢組織中的表達(dá)，進一步驗證微陣列芯片結(jié)果。
　　 2、分別比較miR-21、miR-320在兩組大鼠卵巢組織的表達(dá)差異，初步探討二者在PCOS 發(fā)病中的可能作用。
　　 方法：實時熒光定量PCR檢測PCOS模型組和對照組大鼠卵巢組織miR-21和miR-3