PCOS大鼠卵巢組織血管緊張素受體的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:通過檢測(cè)多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)模型大鼠卵巢組織腎素-血管緊張素系統(tǒng)(rennin angiontensin system,RAS)的兩個(gè)軸系A(chǔ)CE-AngⅡ-AT1/AT2軸及ACE2-Ang-(1-7)-MAS軸血管緊張素受體的表達(dá)水平,觀察其與正常大鼠卵巢組織表達(dá)的不同及相互關(guān)系,以期為多囊卵巢綜合征的發(fā)病機(jī)理、治療途徑提供一個(gè)新思路。
　　 方法:
　　

2、 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組
　　 1.1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
　　 85日齡左右(體重180±10g)健康清潔雌性Spragu Dawley(SD)大鼠40只,購自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心,合格證編號(hào):1111063。(見Fig.1)
　　 1.2、隨機(jī)分組
　　 對(duì)照組20只,模型組20只。
　　 2、實(shí)驗(yàn)方法
　　 2.1、動(dòng)物模型制備
　　 模型組采用Poretsky法建立PCOS大鼠模型,每日

3、頸背皮下注射3IU注射用人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin hormone,HCG)2次,第1天至第10天分別注射劑量遞增的中效胰島素,由0.5IU/天遞增至6.0IU/天,以后每天固定劑量注射6.0IU,22天后檢測(cè)大鼠血睪酮和胰島素水平增高以及陰道涂片持續(xù)出現(xiàn)角化細(xì)胞者符合PCOS模型。對(duì)照組同期皮下注射生理鹽水。
　　 3、標(biāo)本采集及測(cè)定
　　 3.1、標(biāo)本采集
　　

4、 抽取大鼠心臟血,分離血清,測(cè)定血清激素水平;打開大鼠腹腔,觀察雙側(cè)卵巢和子宮的大體形態(tài),分別測(cè)量雙側(cè)卵巢濕重,取一部分卵巢和子宮組織以4％多聚甲醛固定,用于臨床病理診斷。另一部分用生理鹽水沖洗干凈,裝入EP管,迅速放入液氮中,隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中保存,以備后續(xù)RNA的提取。(見Fig.2,3)
　　 3.2、標(biāo)本測(cè)定
　　 光學(xué)顯微鏡觀察HE染色子宮內(nèi)膜及卵巢組織大體形態(tài)變化;熒光定量PCR方法檢測(cè)AT1,AT2及

5、Mas的mRNA在大鼠卵巢組織上的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:模型組大鼠在采用Poretsky法造模22天后檢測(cè)血睪酮和胰島素水平增高以及陰道涂片持續(xù)出現(xiàn)角化細(xì)胞者為造模成功的PCOS大鼠,共計(jì)17只,造模成功率為85.0％。
　　 1、激素水平的變化
　　 二組大鼠血清T與INS水平分別為:對(duì)照組T(4.01±7.62)nmol/L,INS(6.93±2.81)U/L。模型組T(13.17±12.25)nmol/L

6、,INS(28.59±5.32)U/L。模型組血清T及INS水平較對(duì)照組明顯增高(P＜0.01)。(見Table1)
　　 2、卵巢濕重變化
　　 經(jīng)電子天平測(cè)定,二組大鼠卵巢濕重分別為:對(duì)照組(0.0258±0.0017)g,模型組(0.1306±0.0094)g。模型組大鼠卵巢濕重與對(duì)照組相比明顯增加(P＜0.01)。(見Table2)
　　 3、卵巢的形態(tài)學(xué)變化
　　 對(duì)照組大鼠卵巢組織色澤紅,可見

7、黃體;鏡下可見多個(gè)黃體及不同發(fā)育階段的各級(jí)卵泡,其中優(yōu)勢(shì)卵泡可見8～9層顆粒細(xì)胞。模型組卵巢組織為淡紅色,體積增大,極少見黃體形成;鏡下可見卵泡囊性擴(kuò)張,未見卵母細(xì)胞及放射冠等基本結(jié)構(gòu),僅見1～2層顆粒細(xì)胞及大量閉鎖卵泡。(見Fig.4)
　　 4、子宮內(nèi)膜的形態(tài)學(xué)變化
　　 對(duì)照組大鼠子宮組織色澤鮮潤;鏡下可見子宮內(nèi)膜腺體數(shù)量較多,腺腔大而多褶,呈簇狀排列,腺上皮中可見分泌泡。模型組子宮組織略顯充盈;鏡下可見子宮內(nèi)膜腺

8、體數(shù)目明顯減少,腺腔小而直,排列較分散。(見Fig.5)
　　 5、RT-PCR法檢測(cè)AT1,AT2及MAS mRNA的表達(dá)結(jié)果
　　 5.1、AT1mRNA的表達(dá)
　　 PCOS組及對(duì)照組大鼠卵巢組織AT1 mRNA的表達(dá)結(jié)果分別為0.87±0.12,0.43±0.20。PCOS組大鼠卵巢組織AT1 mRNA水平明顯高于對(duì)照組,且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(見Table3)
　　 5.2、AT

9、2mRNA的表達(dá)
　　 PCOS組及對(duì)照組大鼠卵巢組織AT2 mRNA的表達(dá)結(jié)果分別為0.85±0.16,0.53±0.17。 PCOS組大鼠卵巢組織AT2 mRNA水平明顯高于對(duì)照組,且差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(見Table4)
　　 5.3、MAS mRNA的表達(dá)
　　 PCOS組及對(duì)照組大鼠卵巢組織MAS mRNA的表達(dá)結(jié)果分別為0.69±0.29,0.38±0.28。 PCOS組大鼠卵巢組織M