血管緊張素Ⅱ上調(diào)心肌細胞內(nèi)脂素表達的受體機制.pdf

1、目的：脂肪組織不僅是儲存能量的器官，也是一個重要的內(nèi)分泌器官。脂肪細胞分泌的一系列血管活性物質被稱為脂肪因子，如瘦素(Leptin)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介-6(IL-6)、抵抗素(Resistin)和脂聯(lián)素(Adiponectin)等。脂肪因子在維持機體正常的能量代謝、炎癥反應、血管內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞功能以及應激反應等眾多方面發(fā)揮了重要作用。肥胖患者往往因為脂肪組織堆積，脂肪細胞體積增大，導致脂肪因子分泌失調(diào)，最終

2、引起動脈粥樣硬化、高血壓、冠心病、糖尿病、代謝綜合征等一系列相關疾病。Sama1等在外周血淋巴細胞中發(fā)現(xiàn)了一種可以促進前B細胞增殖的蛋白質，稱為前B細胞克隆增強因子(PBEF)。Rongvaux等發(fā)現(xiàn)，PBEF是細胞質中的一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸生物合成酶。Fukuhara等在內(nèi)臟脂肪發(fā)現(xiàn)了一種與PBEF相類似的脂肪細胞因子稱為內(nèi)脂素(Visfatin)。Visfatin是一個52-kDa的二聚體蛋白，每個單體含有491氨基酸，每個單體

3、由19β-折疊和13個α-螺旋及兩個結構域構成。二聚體蛋白中心接有兩個活性位點。最近的研究報告結果顯示，Visfatin可以在骨髓，肝臟和肌肉，腦，腎，脾，睪丸，肺等組織表達，但在內(nèi)臟脂肪組織中高度表達。這已在一些肥胖動物模型中證實，內(nèi)臟脂肪組織中Visfatin表達量較其他組織更多。最近Brown等報道，Visfatin具有類胰島素作用，能夠調(diào)節(jié)胰島素分泌，降低血糖，促進脂肪組織的分化與合成。不僅如此，Visfatin還可以調(diào)節(jié)血管平

4、滑肌的成熟和胰島素的分泌，并參與炎癥反應和免疫功能的調(diào)節(jié)。此外還有文獻報道Visfatin還參與脂質代謝，并可能在穩(wěn)定斑塊過程中起重要作用。
　　腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)在多種疾病狀態(tài)的病理生理中起著顯著作用。RAAS的異常激活，可導致血管平滑肌痙攣、心肌肥厚和纖維化，引起一系列心臟、血管和腎臟并發(fā)癥。大量關于RAAS的臨床研究已被證明，阻斷RAAS對高血壓、急性心肌梗死、慢性心臟衰竭、中風和糖尿病腎病患者有益。由

5、此推論腎素-血管緊張素-醛固酮(RAAS)系統(tǒng)包括其激活產(chǎn)生的細胞因子及信號傳導在冠心病、糖尿病、高血壓及炎癥反應等眾多疾病的病理生理和發(fā)病機制過程中起重要作用。血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)是RAAS中最重要的生物活性物質。AngⅡ受體有AT1～4，其中AngⅡ大部分的生理作用是通過AT1受體介導的。S.D.Crowley等通過將AT1受體缺陷小鼠腎臟移植至正常小鼠的方法，發(fā)現(xiàn)血管緊張素Ⅱ在許多組織中通過AT1受體調(diào)節(jié)水、電解質重吸收，以防

6、止血容量不足引起的循環(huán)衰竭。同時證實了AT1受體在水、電解質重吸收，心力衰竭，高血壓病的病理生理發(fā)展過程有著重要作用。S.B.Gurley等更進一步通過敲除腎小管上皮細胞AT1受體的實驗發(fā)現(xiàn)，AT1受體通過調(diào)節(jié)NHE3鈉-質子交換泵來調(diào)節(jié)水及電解質的重吸收。Schmidt-Ott KM等還發(fā)現(xiàn)AngⅡ作用AT1受體可以觸發(fā)血管平滑肌細胞反應，導致細胞增殖、遷移并促進生長因子和細胞外基質的產(chǎn)生。也有學者發(fā)現(xiàn)AngⅡ可以通過AT1受體介導心

7、肌成纖維細胞膠原合成和分泌，促進心肌細胞纖維化。而AT2僅在胎兒時期高度表達，出生后表達下降，除了腎上腺髓質、子宮、卵巢、血管內(nèi)皮及大腦的特定區(qū)域還存在高密度表達，在健康成人心肌細胞上其表達遠少于AT1。Lucius R及Nio Y等發(fā)現(xiàn)AT2受體某些特殊情況下如心力衰竭、心肌梗死恢復以及皮膚與神經(jīng)系統(tǒng)受損修復等情況下表達會上調(diào)，這預示著AT2受體可能具有介導調(diào)節(jié)增殖、促進細胞分化，促進胚胎發(fā)育和血管形成及促進傷口愈合、組織修復的作用。

8、Munzenmaier DH等還通過給予灌服AT1受體拮抗劑大鼠AngⅡ干預的實驗發(fā)現(xiàn)，給予AngⅡ干預后，大鼠血壓未引起急劇升高，同時降壓作用明顯增強。繼續(xù)給予AT2阻斷劑后，發(fā)現(xiàn)降壓作用卻明顯降低。由此推論AT2受體可能介導血管舒張反應，協(xié)助AT1受體拮抗劑起降壓作用。AT3和AT4作用尚未明確，以上實驗及研究表明，AngⅡ受體在許多心血管疾病的病理生理發(fā)展過程中其重要作用。
　　以往的研究發(fā)現(xiàn)Visfatin可能在心血管疾病

9、中起重要作用，已有實驗證實AngⅡ可以促進心肌細胞表達Visfatin，并在AngⅡ10-6mmol/l，作用24小時條件下，心肌細胞表達Visfatin水平最高。但到目前為止，還沒有任何研究探討血管緊張素Ⅱ促進心肌細胞Visfatin表達上調(diào)的受體機制。本研究通過給予不同AngⅡ受體阻斷劑干預，以進一步了解心肌細胞Visfatin表達與AngⅡ受體關系。為了解心血管疾病的發(fā)病機制增加了新內(nèi)容、新思路，為臨床防治提供一個新的靶點。

10、>　　方法：在無菌試驗條件下不分性別的取新生2-3天的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌細胞進行原代培養(yǎng)，在48小時含血清培養(yǎng)，24小時撤血清培養(yǎng)之后，選取形態(tài)及生長狀態(tài)良好的心肌細胞隨機分為4組：(1)空白對照組、(2)AngⅡ干預組、(3)AngⅡ+AT1R(替米沙坦)組、(4)AngⅡ+AT2R(PD123319)組，后三組均給予AngⅡ10-6mol/L干預24h。通過RT-PCR和ELISA技術檢測心肌細胞Visfa

11、tin的表達。
　　結果：
　　1.體外成功培養(yǎng)新生SD大鼠心肌細胞。
　　2.給予AngⅡ干預后Visfatin-mRNA及蛋白表達均高于無AngⅡ作用的組。
　　3.AngⅡ+AT1R(替米沙坦)組和AngⅡ+AT2R(PD123319)組Visfatin-mRNA及蛋白表達有明顯差異，AngⅡ+AT2R(PD123319)組Visfatin-mRNA及蛋白表達明顯高于AngⅡ+AT1 R(替米沙坦)組。