血管緊張素Ⅱ通過JAK-STAT通道上調(diào)心肌細(xì)胞內(nèi)酯素表達.pdf

1、目的：隨著近年對脂肪組織研究的深入，傳統(tǒng)觀念中的儲能器官的功能得到了更全面的認(rèn)識。脂肪組織可分泌多種因子，目前發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子有30多種，包括脂聯(lián)素(adiponectin)、促酰化蛋白(ASP)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、內(nèi)脂素(visfatin)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、抵抗素(resistin)、瘦素(leptin)、網(wǎng)膜素(omentin)、血纖維蛋白溶酶原激活抑制劑(PAI-1)、視黃醇結(jié)合蛋白

2、4(RBP4)等。這些因子不僅可調(diào)節(jié)機體能量代謝及神經(jīng)內(nèi)分泌功能，并能參與機體免疫及炎癥反應(yīng)。
　　很多脂肪細(xì)胞因子參與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，內(nèi)脂素主要是由內(nèi)臟脂肪細(xì)胞分泌，在脂質(zhì)含量豐富的巨噬細(xì)胞中和急性冠脈病變中高表達。巨噬細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)，而動脈粥樣硬化的形成與炎癥、缺氧、不穩(wěn)定斑塊破裂、血管內(nèi)皮功能紊亂相關(guān)，故內(nèi)脂素有可能作為一個促炎因子參與動脈粥樣硬化的形成。有研究顯示內(nèi)脂素可能通過誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞的形成，促進血管斑塊的形成

3、，進而導(dǎo)致動脈粥樣硬化。內(nèi)脂素可以促進血管平滑肌細(xì)胞的成熟并能致血管重塑，具有類胰島素作用，但并不降低胰島素水平。血漿內(nèi)脂素水平的升高與心力衰竭、心肌細(xì)胞肥大及心肌細(xì)胞纖維化過程相關(guān)，這為預(yù)防及治療心血管疾病開辟了新的方向。
　　RAAS中主要的活性物質(zhì)是血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)，可以增強交感神經(jīng)活性，促進血管收縮、升高血壓，進而增強心肌收縮力，加快心室率致心肌細(xì)胞反應(yīng)性增大；AngⅡ可通過刺激成纖維細(xì)胞，導(dǎo)致結(jié)締組織生長因子表達

4、增高，導(dǎo)致心肌細(xì)胞纖維化。AngⅡ發(fā)揮作用需要與細(xì)胞膜上的特異性的受體(AT1 AT2)結(jié)合。AT1受體在各臟器中廣泛分布，如肝臟、腦、肺、腎臟和脈管系統(tǒng)。AT1受體由359個氨基酸組成，屬于G-蛋白偶聯(lián)受體家族，人類的AT1受體基因位于3號染色體上。一旦AngⅡ與AT1受體結(jié)合，一系列的信號被激活，這樣血管緊張素Ⅱ依照信號激活的順序，依次發(fā)揮它的生理作用，如促進血管內(nèi)皮細(xì)胞增生及血管平滑肌細(xì)胞增殖，并能促進心肌間質(zhì)纖維化及心肌細(xì)胞肥大

5、。AT1受體活性的調(diào)節(jié)是高血壓、高脂血癥、高胰島素血癥等機體功能紊亂的因素之一。AT1受體在血小板中的表達上調(diào)，增強了AngⅡ收縮血管作用。他汀類降脂藥的作用是通過下調(diào)AT1受體的活性，從而減少AngⅡ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，減弱了AngⅡ的作用，達到降低血脂、穩(wěn)定斑塊的作用。AT2在成人體內(nèi)較胚胎組織中明顯減少，但在一些機體應(yīng)激狀態(tài)下，如心肌梗死、創(chuàng)傷愈合、血管內(nèi)膜損傷和心衰等過程中，AT2的表達升高。有研究證實內(nèi)脂素的表達主要與AT1受體的介導(dǎo)密

6、切相關(guān)，AT1受體有三個主要通道：蛋白激酶C通路，AKT激酶通路，細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶通路，SP600125、U0126和AG490分別是這三個主要通道的特異性阻斷劑。在前期試驗中證實：心肌細(xì)胞是可以表達內(nèi)脂素的，在10-6mmol/1 AngⅡ的濃度下，作用24小時，心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達的水平最高。本實驗研究在心肌細(xì)胞內(nèi)脂素表達最高的條件下，觀察內(nèi)脂素的表達水平與AT1受體通路的關(guān)系。
　　方法：在無菌試驗條件下不分性別的取新生2-

7、3天的Sprague-Dawley(SD)乳鼠心肌細(xì)胞進行原代培養(yǎng)，48小時含血清培養(yǎng)，24小時撤血清培養(yǎng)后，選取生長狀態(tài)好的細(xì)胞隨機分為8組：①對照組②10-6mol/L AngⅡ組②SP600125組④U0126組⑤AG490組⑥10-6mol/LAngⅡ+SP600125⑦10-6mol/L AngⅡ+U0126組⑧10-6mol/L AngⅡ+AG490組。單加阻滯劑組的作用時間為30min；AngⅡ與阻滯劑共同參與的組作用時間

8、均為24小時，應(yīng)用RT-PCR和ELISA技術(shù)檢測心肌細(xì)胞中內(nèi)脂素mRNA和蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：
　　1.在體外，成功培養(yǎng)了SD乳鼠心肌細(xì)胞。
　　2.加入AngⅡ作用的組Visfatin-mRNA及蛋白的表達均高于無AngⅡ作用的組。
　　3.SP600125組、AG490組、U0126組和對照組Visfatin-mRNA及蛋白的表達無明顯差異。
　　4.10-6mol/L AngⅡ+SP6001

9、25組、10-6mol/L AngⅡ+U0126組、10-6mol/LAngⅡ+AG490組的Visfatin-mRNA及蛋白的表達均低10-6mol/L AngⅡ組。
　　5.10-6mol/L AngⅡ+AG490組Visfatin-mRNA及蛋白的表達低于10-6mol/LAngⅡ+SP600125及10-6mol/L AngⅡ+U0126組。
　　6.10-6mol/L AngⅡ+SP600125和10-6mol/L