疏肝補腎祛痰法對PCOS大鼠卵巢TGF-β1-smad及ECM相關因子表達的影響.pdf

1、目的：研究疏肝補腎祛痰中藥對多囊卵巢綜合癥大鼠血清激素的影響，觀察其對實驗性多囊卵巢綜合癥大鼠卵巢TGF-β1/smad轉(zhuǎn)導通路及TIMPS/MMPS的影響,探討中藥改善大鼠多囊卵巢綜合征的癥狀及抗大鼠卵巢纖維化的效果和作用機理
　　方法：選用6周齡健康的SD雌性大鼠,設正常對照組、模型組、西藥陽性組、中藥治療低劑量組、中藥治療中劑量組、中藥治療高劑量組等共6組。除正常對照組灌服羧甲基纖維素溶液外,其余5組均采用濃度為0.125m

2、g/ml的來曲唑-羧甲基纖維素溶液灌胃制備多囊卵巢綜合癥模型,造模的同時予中藥藥物灌胃治療，連續(xù)灌服3天后休息1天，一共灌服21次后,處死各組大鼠,腹主動脈取血,運用酶聯(lián)免疫分析（ELISA）檢測多囊卵巢綜合癥大鼠血清激素FSH、LH、E2、T等及TIMPS、MMPS含量；觀察在光鏡和電鏡下大鼠卵巢的病理變化；免疫組化法觀察大鼠卵巢TGF-β1、smad3的表達及分布；蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測大鼠卵巢TGF-β1、

3、smad3/4、smad7的表達。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠血清激素FSH、LH、E2、T的變化
　?。?）大鼠血清 FSH水平的表達
　　大鼠血清中 FSH水平以空白組最高。與模型組比較，各組大鼠FSH血清含量均有升高，有顯著性差異（P＜0.01），西藥對照組與中藥低劑量組對比有顯著性差異（P＜0.05）,而西藥對照組與中藥中、高劑量組各治療組間對比，無顯著性差異（P>0.05）；中藥低、中藥高、西藥對照組與正

4、常組對比FSH血清含量升高有明顯性差異（P＜0.05）；但各治療組中僅中藥中劑量與正常對照組相比，無顯著性差異（P>0.05）。
　　(2)大鼠血清 LH水平的表達
　　模型組血清 LH水平最高，其余各組明顯較低，故正常對照組和模型組比較，有顯著差異（P＜0.01）；中藥低、中、高組、西藥組對比模型組大鼠血清 LH水平的表達均有降低，有顯著性差異P<0.01），說明各治療組均能降低 LH水平；但中藥各劑量治療組與西藥對照組相

5、比，差異無顯著性變化（P>0.05）。
　　(3)大鼠血清LH/FSH比值水平的比較
　　血清LH/FSH的比值以模型組最高，模型組與正常對照組相比，有顯著性差異（P<0.01）；西藥對照組、中藥低、中、高劑量組與模型組對比，血清LH/FSH比值降低，有顯著性差異（P<0.01）；但中藥中劑量組與西藥對照組對比無顯著性差異（P>0.05），且各治療組中僅中藥中劑量與正常對照組相比，無顯著性差異（P>0.05），故而認為在改善

6、 LH/FSH比值中中藥中劑量組效果最佳。
　　(4)大鼠血清E2水平的表達
　　與正常對照組比較，模型組血清E2水平的表達偏低，有顯著性差異（P＜0.01）,與模型組比較,中藥各劑量組血清E2水平的表達明顯升高（P＜0.05）,且中藥低、中、高劑量各組血清E2水平的表達，無顯著性差異（P>0.05）；西藥與中藥各劑量組間對比，無顯著性差異（P>0.05）。(5)大鼠血清 T水平的表達
　　模型組大鼠血清 T水平顯著增

7、高，正常組大鼠血清 T水平最低，故正常對照組和模型組比較，有顯著差異（P＜0.05）；模型組與各治療組對比，血清 T水平的表達明顯升高有顯著性差異（P<0.05）。
　　2.TGF-β1/smad轉(zhuǎn)導通路：
　　（1）TGF-β1及其受體的表達：與正常組比較,模型組中TGF-β1、TGFR-β1表達增高（P＜0.01）,與模型組比較,陽性組及中藥低、中、高劑量組中TGF-β1、TGFR-β1的表達降低（P＜0.01）,與西藥

8、組相比中藥低、中劑量組的表達無明顯差異性（P>0.05）。
　?。?）Smad3的表達：與空白組比較，模型組中smad3表達增高RI值有顯著性（P＜0.01）,與模型組比較,陽性組及中藥低、中、高組中smad3的表達降低（P＜0.05）,中藥低中高組smad3的表達無明顯差異性（P>0.05）。（3）Smad4的表達：與空白組比較，模型組中smad4表達增高RI值有顯著性（P＜0.01）,與模型組比較,西藥組及中藥中、高劑量組中s

9、mad4的表達降低（P＜0.01）,且與西藥組相比,中藥中、高組表達無差異（P＞0.05）。
　?。?）Smad7的表達：與空白組比較，模型組Smad7蛋白表達顯著降低RI值比較有統(tǒng)計學差異（F=53.274，P＜0.01）；中藥中劑量組、西藥組無顯著性差異（P＞0.05）；與模型組比較，各藥物組均有所升高，中藥低RI值比較有統(tǒng)計學差異（F=43.432，P＜0.01），中藥中劑量組RI值比較有統(tǒng)計學差異（F=49.762，P＜0

10、.01），中藥高劑量組RI值比較有統(tǒng)計學差異（F=36.854，P＜0.05），西藥組RI值比較有統(tǒng)計學差異（F=46.778， P＜0.01）。
　　3.TIMPS/MMPS體系：
　?。?）TIMPS的表達：與正常對照組相比,模型組表達升高，有顯著差異（P＜0.01），與模型組相比各治療組表達均降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），且與西藥組相比,中藥低、中劑量組表達無顯著性差異（P＞0.05）。（2）MMPS的表達：

11、與正常對照組相比,模型組表達升高有顯著性差異（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組表達降低，有顯著性差異（P＜0.01）；中藥低、中、高劑量各組血清MMPS水平的表達，無顯著性差異（P>0.05）；西藥與中藥各劑量組間對比，無顯著性差異（P>0.05）。
　　4.大鼠卵巢超微結(jié)構的觀察：
　?。?）大鼠卵巢光鏡觀察結(jié)果:多囊卵巢大鼠卵巢見囊狀擴張的卵泡,呈多囊樣改變，可見初級卵泡、閉鎖卵泡及囊性擴張卵泡，顆粒細胞層減少;中

12、藥疏肝補腎祛痰法治療后可見不同發(fā)育期的卵泡，成熟卵泡增加，顆粒細胞明顯增多,提示中藥疏肝補腎祛痰法治療后大鼠卵巢PCOS狀態(tài)的改善和排卵功能的恢復；
　?。?）大鼠卵巢電鏡觀察結(jié)果:電鏡下大鼠卵巢顆粒細胞細胞核核膜皺縮，核形態(tài)不規(guī)則，卵巢顆粒細胞核呈團塊狀，染色質(zhì)濃縮、邊集化，胞內(nèi)可見大量脂質(zhì)空泡，線粒體腫脹、存在明顯的凋亡形態(tài)特征，中藥疏肝補腎祛痰法治療后顆粒細胞可見正常的細胞核和核仁，核內(nèi)染色質(zhì)均勻，多層卵巢顆粒細胞均勻分布，

13、胞質(zhì)內(nèi)可見線粒體豐富，呈長橢圓形。
　　結(jié)論：
　　1.成功建立了來曲唑誘導的PCOS大鼠病理模型,對該模型從卵巢形態(tài)及內(nèi)分泌激素方面進行了研究,結(jié)果表明其病理形態(tài)和血清激素水平均與PCOS非常相似,因此認為本模型是一種比較理想的研究PCOS的動物模型；
　　2.中藥疏肝補腎祛痰法能夠改善 PCOS大鼠卵巢多囊樣改變及排卵障礙狀況;可改善PCOS大鼠卵巢顆粒細胞內(nèi)細胞核及線粒體狀態(tài)、減少卵泡膜細胞內(nèi)增多滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和脂滴

14、數(shù)量,提示其可能通過對顆粒細胞和卵泡膜細胞超微結(jié)構的影響,改善PCOS大鼠血清激素水平；
　　3.中藥疏肝補腎祛痰法通過調(diào)整內(nèi)分泌水平，降低血清 LH、T的激素水平，升高E2激素的表達以及降低 LH/FSH比值，來達到治療多囊卵巢綜合癥的目的；
　　4.中藥疏肝補腎祛痰法可顯著改善大鼠卵巢纖維化的程度，通過抑制TGF-β1/smads的轉(zhuǎn)導通路,降低TGF-β1、smad3/4的表達水平，升高smad7的表達，來達到抗卵巢纖