黃芪多糖對糖尿病足潰瘍成纖維細胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的： 成纖維細胞(Fbs)是參與創(chuàng)面愈合的主要細胞，可合成、分泌膠原蛋白、糖胺多糖等細胞外基質(zhì)和多種細胞因子。研究表明，在糖尿病難愈性創(chuàng)面中，F(xiàn)bs增殖能力較正常皮膚和糖尿病急性創(chuàng)面有很大削弱。故提高Fbs的增殖能力可能是加速創(chuàng)面愈合的重要方法。 糖尿病足潰瘍在中醫(yī)學(xué)屬脫疽范圍，黃芪具有托毒排膿，生肌止血，促進壞死細胞重新生長的作用。臨床研究證實中藥黃芪可以促進糖尿病足潰瘍創(chuàng)面愈合，但其機制不清楚。 本研究利用

2、黃芪多糖(APs)干預(yù)體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍Fbs，觀察黃芪多糖對體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍Fbs數(shù)量、形態(tài)及分泌增殖功能、細胞衰老的影響，從細胞的角度來探討黃芪多糖促進潰瘍創(chuàng)面愈合的機制。 方法: 1．糖尿病足病截肢患者10例，均符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準，其中男性6例女性4例，年齡57±8.2歲，其空腹血糖(FBG)9.4±1.6mmol/L，餐后2小時血糖(P2BG)14.2±2.4mmol/L，糖化血紅蛋白(

3、HbA<,1c>)9.1±1.0％，糖尿病足潰瘍病程超過4周，排除下肢靜脈性潰瘍。按Wagner分級法在Ⅲ級6例，Ⅳ級4例。標(biāo)本取材于患者潰瘍邊緣及截肢最遠端組織。正常對照者10例，取自年齡、性別等與前兩組基本相匹配的非糖尿病外傷及骨科截肢患者的手術(shù)切口，無系統(tǒng)性硬化病、腎病等疾病的病例。 2．取材后用組織塊法培養(yǎng)Fbs，經(jīng)免疫組化抗波形蛋白和抗角蛋白染色，證實為Fbs。4-6代細胞用于實驗。 3．加入不同濃度的黃芪多糖(分別為

4、2.5ug/ml、10ug/ml、40ug/ml、160ug/ml、640ug/ml)培養(yǎng)以觀察量效關(guān)系，其中160ug/ml分別培養(yǎng)0-7天以觀察時效關(guān)系。 4．利用MTT比色試驗評價糖尿病足潰瘍Fbs的增殖能力。 5．通過羥脯氨酸測定了解糖尿病足潰瘍Fbs的膠原分泌功能。 6．利用β-半乳糖苷酶染色陽性率評價糖尿病足潰瘍Fbs的老化情況。 7．TRAP-PCR測定糖尿病足潰瘍Fbs端粒酶活性。

5、 結(jié)果: 1．Fbs的鑒定：培養(yǎng)的Fbs 6小時貼壁，呈多角形、長梭形，免疫組化鑒定結(jié)果顯示：波形蛋白表達陽性，角蛋白表達陰性。 2．不同濃度的APs于預(yù)48小時后增加或減少Fbs的數(shù)量。 3．不同濃度的黃芪多糖于預(yù)48小時后促進或抑制Fbs的增殖能力。 4．不同濃度的黃芪多糖干預(yù)48d,時后增加或降低Fbs的膠原分泌功能。 5．不同濃度黃芪多糖對Fbs衰老情況的影響：根據(jù)MTT法檢測成纖維細胞增

6、殖的結(jié)果，得出黃芪多糖的最佳作用濃度及時間，由于β-半乳糖苷酶(SA-B-Gal)染色陽性率隨細胞代齡增加而增加，本實驗儀檢測黃芪多糖160ug/ml組濃度、第4-8代成纖維細胞(P<,4-8>)SA-β-Gal酶染色陽性率。對照組、DFUs近端+APs160ug/ml組、DFUs遠端組、正常人組第6天成纖維細胞SA-β-Gal染色陽性率分別為(65±2)％、(45±3)％、(44±2)％、(5±1)％，對照組、DFUs遠端組、DFUs

7、近端+APs組成纖維細胞SA-β-Gal染色陽性率明顯高于正常人；對照組成纖維細胞SA-β-Gal染色陽性率高于DFUs近端+APs組；DFUs遠端成纖維細胞Fbs SA-β-Gal染色陽性率略低于DFUs近端+APs組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 6．糖尿病足潰瘍Fbs端粒酶表達陰性結(jié)論糖尿病足潰瘍處成纖維細胞增殖能力、膠原合成能力減退，細胞衰老：黃芪多糖在10ug/ml-160ug/ml濃度范圍內(nèi)能增加體外培養(yǎng)的糖尿病足潰瘍成纖維細