鄰苯二甲酸酯類對青春期雄性大鼠生殖內分泌功能的影響及其機制研究.pdf

1、背景:
　　近年來,環(huán)境因素對男性生殖健康的影響越來越引起學者們的注意。鄰苯二甲酸酯類是常用的塑料制品增塑劑,有很強的擬雌激素樣作用,是公認的環(huán)境內分泌干擾物,不但可以干擾下丘腦-垂體-睪丸軸的平衡,而且還可以直接或(和)間接地損害精子的生成。青春期是男性生長發(fā)育的關鍵時期,在此期受到外界環(huán)境不良干擾可能會影響男性生殖功能和個體的生長發(fā)育。最近,有學者認為,我們所處的環(huán)境中含有多種鄰苯二甲酸酯類物質,所以我們有必要評估兩種或多種鄰

2、苯二甲酸酯類混合物對人類健康的影響。鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯和鄰苯二甲酸二丁酯是世界上最常用的兩種增塑劑,并且人群最常見的接觸方式是經口接觸污染的水或食物。因此,本研究試圖探討鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯和鄰苯二甲酸二丁酯聯(lián)合經口染毒對青春期大鼠生殖內分泌功能的影響及其機制;這些研究對阻止、延緩或減弱上述因素對人類生殖健康的損傷有重要的意義。
　　目的:
　　1)研究鄰苯二甲酸酯類對雄性性行為的影響及其機制。

3、　　2)探討鄰苯二甲酸酯類對睪丸、附睪組織形態(tài)及生精功能的影響,并闡明生殖內分泌功能的改變在其中的作用。
　　3)研究睪丸內與精子功能相關的酶類活性的改變以及睪丸內氧化-抗氧化系統(tǒng)的改變,進一步探討這些改變在生殖功能損傷機制中的作用。
　　4)研究睪丸中銅、鋅含量及銅/鋅比值的變化在鄰苯二甲酸酯類引起生殖損傷中的作用。
　　材料與方法:
　　健康雄性SD大鼠(6周齡)56只,分籠飼養(yǎng)于標準動物房(22℃),自由飲

4、食,給予規(guī)律光照(12 h:12 h)。20只健康成年雌性SD大鼠經處理后與雄鼠交配,觀察雄鼠性行為學改變。將所有雄鼠隨機分為4組,每組14只,將DEHP和DBP等質量溶解于玉米油中,灌胃劑量分別為0(對照組)、375、750、1500 mg/(kg.d)。于染毒2周末各組斷頭法處死7只大鼠。染毒第22~24天觀察雄鼠性行為學的改變,染毒4周末各組斷頭法處死7只大鼠。每天同一時間稱重,灌胃量為5ml/Kg體重。大鼠處死后收集標本,采用組

5、織學方法分析各組睪丸曲細精管直徑大小和生精上皮高度變化,流式細胞分析儀檢測各組睪丸生精細胞的變化,并用放免法檢測血清中睪酮和雌二醇含量的變化;采用紫外分光光度計法檢測血清和睪丸勻漿液中ACP、SDH、SOD和MDA的含量變化以及染毒4周血清中NO的變化;采用石墨爐原子發(fā)光法檢測睪丸組織中銅、鋅含量以及銅/鋅比值的變化。
　　結果:
　　1.大鼠性行為學觀察:在30min內,對照組和750 mg/kg.d組分別有6只大鼠完成射

6、精,而375 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組分別有7只和5只大鼠完成射精。插入潛伏期在1500mg/kg.d組較對照組和375 mg/kg.d組延長(P<0.05);射精前插入次數(shù)在1500 mg/kg.d組與對照組相比差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.睪丸組織形態(tài)學改變:曲細精管直徑在染毒2周750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組較對照組降低,染毒4周各劑量組曲細精管直徑均較對照組明顯減小。

7、染毒2、4周,生精上皮高度在375 mg/kg.d組較對照組降低(P<0.05),在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組與對照組相比降低均具有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　3.流式細胞儀檢測生精細胞的變化:染毒2、4周,亞單倍體細胞比例在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組升高;隨染毒劑量增加,1C細胞和4C比例降低,2C細胞比例升高, G0/G1期細胞比例升高,G2/M期細胞比例降低。

8、r>　　4.血清睪酮(T)、雌二醇(E2)和NO的變化:染毒2周,血清T含量在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組較對照組明顯降低(P<0.01);血清中E2在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組較對照組明顯升高(P<0.05);染毒4周,血清T和E2含量在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組與對照組相比差別均具有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01);血清中NO含量在1500 mg/kg.d組較

9、對照組升高(P<0.05)。
　　5.血清及睪丸勻漿中ACP、SDH、SOD和MDA活性的變化:染毒2周,血清SOD活性在1500 mg/kg.d組明顯比對照組降低(P<0.05),睪丸勻漿中ACP、SOD和MDA在1500 mg/kg.d組與對照組相比差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05);染毒4周,血清 ACP活性在750 mg/kg.d組與對照組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05),在1500 mg/kg.d組與對照組相比有高度統(tǒng)計學

10、意義(P<0.01),血清SDH活性在1500 mg/kg.d組與對照比差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。睪丸勻漿中ACP、SDH、SOD和MDA在750 mg/kg.d組與對照組相比差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05),在1500 mg/kg.d組各項指標與對照組相比差別有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　6.睪丸組織中銅、鋅及銅/鋅比值的變化:染毒2周,睪丸組織中銅含量在1500 mg/kg.d組升高(P<0.05),鋅的含量

11、和銅/鋅比值較對照組差別明顯(P<0.05);染毒4周,在1500 mg/kg.d組睪丸組織中鋅含量明顯降低(P<0.05),銅/鋅比值明顯升高(P<0.05)。
　　結論:
　　1.鄰苯二甲酸酯類可以引起雄性大鼠性行為的異常,其機制可能與體內性激素水平紊亂和NO水平變化有關。
　　2.鄰苯二甲酸酯類對睪丸組織形態(tài)結構有嚴重影響,破壞睪丸生精上皮結構的完整性,干擾生精過程。
　　3.生精相關酶活性的改變和睪丸內氧