鄰苯二甲酸酯類對青春期雄性大鼠生殖內(nèi)分泌功能的影響及其機制研究.pdf

1、背景:
　　近年來,環(huán)境因素對男性生殖健康的影響越來越引起學(xué)者們的注意。鄰苯二甲酸酯類是常用的塑料制品增塑劑,有很強的擬雌激素樣作用,是公認的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,不但可以干擾下丘腦-垂體-睪丸軸的平衡,而且還可以直接或(和)間接地損害精子的生成。青春期是男性生長發(fā)育的關(guān)鍵時期,在此期受到外界環(huán)境不良干擾可能會影響男性生殖功能和個體的生長發(fā)育。最近,有學(xué)者認為,我們所處的環(huán)境中含有多種鄰苯二甲酸酯類物質(zhì),所以我們有必要評估兩種或多種鄰

2、苯二甲酸酯類混合物對人類健康的影響。鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯和鄰苯二甲酸二丁酯是世界上最常用的兩種增塑劑,并且人群最常見的接觸方式是經(jīng)口接觸污染的水或食物。因此,本研究試圖探討鄰苯二甲酸二(2-乙基己基)酯和鄰苯二甲酸二丁酯聯(lián)合經(jīng)口染毒對青春期大鼠生殖內(nèi)分泌功能的影響及其機制;這些研究對阻止、延緩或減弱上述因素對人類生殖健康的損傷有重要的意義。
　　目的:
　　1)研究鄰苯二甲酸酯類對雄性性行為的影響及其機制。

3、　　2)探討鄰苯二甲酸酯類對睪丸、附睪組織形態(tài)及生精功能的影響,并闡明生殖內(nèi)分泌功能的改變在其中的作用。
　　3)研究睪丸內(nèi)與精子功能相關(guān)的酶類活性的改變以及睪丸內(nèi)氧化-抗氧化系統(tǒng)的改變,進一步探討這些改變在生殖功能損傷機制中的作用。
　　4)研究睪丸中銅、鋅含量及銅/鋅比值的變化在鄰苯二甲酸酯類引起生殖損傷中的作用。
　　材料與方法:
　　健康雄性SD大鼠(6周齡)56只,分籠飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動物房(22℃),自由飲

4、食,給予規(guī)律光照(12 h:12 h)。20只健康成年雌性SD大鼠經(jīng)處理后與雄鼠交配,觀察雄鼠性行為學(xué)改變。將所有雄鼠隨機分為4組,每組14只,將DEHP和DBP等質(zhì)量溶解于玉米油中,灌胃劑量分別為0(對照組)、375、750、1500 mg/(kg.d)。于染毒2周末各組斷頭法處死7只大鼠。染毒第22~24天觀察雄鼠性行為學(xué)的改變,染毒4周末各組斷頭法處死7只大鼠。每天同一時間稱重,灌胃量為5ml/Kg體重。大鼠處死后收集標(biāo)本,采用組

5、織學(xué)方法分析各組睪丸曲細精管直徑大小和生精上皮高度變化,流式細胞分析儀檢測各組睪丸生精細胞的變化,并用放免法檢測血清中睪酮和雌二醇含量的變化;采用紫外分光光度計法檢測血清和睪丸勻漿液中ACP、SDH、SOD和MDA的含量變化以及染毒4周血清中NO的變化;采用石墨爐原子發(fā)光法檢測睪丸組織中銅、鋅含量以及銅/鋅比值的變化。
　　結(jié)果:
　　1.大鼠性行為學(xué)觀察:在30min內(nèi),對照組和750 mg/kg.d組分別有6只大鼠完成射

6、精,而375 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組分別有7只和5只大鼠完成射精。插入潛伏期在1500mg/kg.d組較對照組和375 mg/kg.d組延長(P<0.05);射精前插入次數(shù)在1500 mg/kg.d組與對照組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.睪丸組織形態(tài)學(xué)改變:曲細精管直徑在染毒2周750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組較對照組降低,染毒4周各劑量組曲細精管直徑均較對照組明顯減小。

7、染毒2、4周,生精上皮高度在375 mg/kg.d組較對照組降低(P<0.05),在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組與對照組相比降低均具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　3.流式細胞儀檢測生精細胞的變化:染毒2、4周,亞單倍體細胞比例在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組升高;隨染毒劑量增加,1C細胞和4C比例降低,2C細胞比例升高, G0/G1期細胞比例升高,G2/M期細胞比例降低。

8、r>　　4.血清睪酮(T)、雌二醇(E2)和NO的變化:染毒2周,血清T含量在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組較對照組明顯降低(P<0.01);血清中E2在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組較對照組明顯升高(P<0.05);染毒4周,血清T和E2含量在750 mg/kg.d組和1500 mg/kg.d組與對照組相比差別均具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);血清中NO含量在1500 mg/kg.d組較

9、對照組升高(P<0.05)。
　　5.血清及睪丸勻漿中ACP、SDH、SOD和MDA活性的變化:染毒2周,血清SOD活性在1500 mg/kg.d組明顯比對照組降低(P<0.05),睪丸勻漿中ACP、SOD和MDA在1500 mg/kg.d組與對照組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);染毒4周,血清 ACP活性在750 mg/kg.d組與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),在1500 mg/kg.d組與對照組相比有高度統(tǒng)計學(xué)

10、意義(P<0.01),血清SDH活性在1500 mg/kg.d組與對照比差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。睪丸勻漿中ACP、SDH、SOD和MDA在750 mg/kg.d組與對照組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),在1500 mg/kg.d組各項指標(biāo)與對照組相比差別有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　6.睪丸組織中銅、鋅及銅/鋅比值的變化:染毒2周,睪丸組織中銅含量在1500 mg/kg.d組升高(P<0.05),鋅的含量

11、和銅/鋅比值較對照組差別明顯(P<0.05);染毒4周,在1500 mg/kg.d組睪丸組織中鋅含量明顯降低(P<0.05),銅/鋅比值明顯升高(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.鄰苯二甲酸酯類可以引起雄性大鼠性行為的異常,其機制可能與體內(nèi)性激素水平紊亂和NO水平變化有關(guān)。
　　2.鄰苯二甲酸酯類對睪丸組織形態(tài)結(jié)構(gòu)有嚴(yán)重影響,破壞睪丸生精上皮結(jié)構(gòu)的完整性,干擾生精過程。
　　3.生精相關(guān)酶活性的改變和睪丸內(nèi)氧