吳茱萸化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究.pdf

1、目的：本文主要針對(duì)生物堿類成分進(jìn)行分離純化，為其藥效物質(zhì)探討、質(zhì)量評(píng)價(jià)以及進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供對(duì)照物質(zhì)；建立同時(shí)測(cè)定吳茱萸及其習(xí)用品藥材中檸檬苦素、吲哚類生物堿（14N-甲酰二氫吳茱萸次堿，吳茱萸堿，吳茱萸次堿）、喹諾酮類生物堿（1-甲基-2-正十一烷基-4(1H)-喹諾酮，吳茱萸卡品堿，二氫吳茱萸卡品堿）含量的HPLC方法；運(yùn)用GC-MS結(jié)合化學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)對(duì)不同產(chǎn)地、不同成熟度的吳茱萸揮發(fā)油成分的比較分析。
　　方法：采用硅膠柱色譜、

2、Sephadex LH-20柱色譜、Flash快速制備、制備/半制備HPLC等現(xiàn)代色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，根據(jù)化合物的光譜數(shù)據(jù)(ESI-MS,1H-NMR,13C-NMR,1H-1HCOSY，HMBC，HSQC，NOESY)等波譜學(xué)技術(shù)及與文獻(xiàn)對(duì)照等方法鑒定其結(jié)構(gòu)；采用YMC C18(250 mm×4.6 mm，5μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈（A）-四氫呋喃（B）-5 mmol·L-1醋酸銨緩沖液（pH3.8）（C），梯度洗脫；流速1.0

3、mL·min-1；柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)220，250 nm。采用水蒸汽蒸餾法提取吳茱萸揮發(fā)油，氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS)技術(shù)分析其揮發(fā)性成分；通過(guò)檢索Nist8.0 LIB標(biāo)準(zhǔn)圖庫(kù)，結(jié)合文獻(xiàn)，鑒定其成分，峰面積歸一化法確定各組分在揮發(fā)油中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。
　　結(jié)果：（1）從吳茱萸果實(shí)的提取物中共分離得到20個(gè)化合物，通過(guò)各種波譜學(xué)技術(shù)和方法對(duì)其進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，包括5個(gè)吲哚類生物堿，11個(gè)喹諾酮類生物堿，1個(gè)降檸檬苦素，2個(gè)酰胺，

4、1個(gè)甾醇?；衔锩Q分別為：吳茱萸堿、吳茱萸次堿、7β-羥基吳茱萸次堿、二氫吳茱萸卡品堿、2-羥基-4-甲氧基-3-（3'-甲基-2'-丁烯基）-喹諾酮、1-甲基-2-正壬基-4(1H)-喹諾酮、1-甲基-2-正癸基-4(1H)-喹諾酮、1-甲基-2-正十一烷基-4(1H)-喹諾酮、14N-甲酰二氫吳茱萸次堿、1-甲基-2-正十五烷基-4(1H)-喹諾酮、1-甲基-2-[(Z)-6-十一烯基]-4(1H)-喹諾酮、吳茱萸卡品堿、1-甲基

5、-2-[(Z)-10-十五烯基]-4(1H)-喹諾酮、1-甲基-2-[(Z)-4-十三烯基]-4(1H)-喹諾酮、1-甲基-2-[(6Z,9Z)-6,9-十五二烯基]-4(1H)-喹諾酮、Calodendrolide、N-甲基-鄰-氨基苯甲酰胺、β-谷甾醇、乙酰胺。（2）對(duì)5種18批吳茱萸類藥材進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果顯示7種被測(cè)成分在5種藥材中均有分布，但含量差異很大。16批正品吳茱萸中7種成分的總含量在9.46～69.9 mg·g-1，平

6、均為28.2 mg·g-1。密果吳萸中7種成分的總含量為25.8 mg·g-1，在正品含量范圍內(nèi)，略低于平均值；臭辣吳萸中7種成分的總含量為7.69 mg·g-1，低于正品的含量下限。（3）初步鑒定吳茱萸中39個(gè)揮發(fā)性化合物，其中21個(gè)為它們的共有成分。聚類分析和主成分分析結(jié)果顯示良好的一致性，依據(jù)成熟度，樣品被分為三個(gè)集群（樹(shù)狀圖）或分布于三個(gè)區(qū)域（散點(diǎn)圖）。不同產(chǎn)地、不同品種、不同成熟度的樣品中揮發(fā)油主要成分的種類上沒(méi)有顯著性差異，

7、而主要成分的含量在不同成熟度的樣品中差異很大。其中，近成熟的果實(shí)中，β-月桂烯(19.83％-29.54%)、檸檬烯(19.99%-26.18%)、β-反式羅勒烯(10.31-31.77%)是主要成分；成熟的果實(shí)中β-反式羅勒烯(26.86-51.80%)的含量最高，而β-月桂烯(3.00%-5.01%)、檸檬烯(0.24%-3.57%)的含量很低；石竹烯(10.22%-14.85%)主要存在于不成熟的果實(shí)中，β-月桂烯(0.02%-6

8、.50%)、檸檬烯(0.02%-7.40%)、β-反式羅勒烯(0.02%-8.68%)含量較低。因此，β-月桂烯、檸檬烯、β-反式-羅勒烯及石竹烯可以作為化學(xué)標(biāo)記性成分，用于區(qū)分和評(píng)估不同成熟度的吳茱萸果實(shí)。
　　結(jié)論：吳茱萸中生物堿成分的分離及鑒定，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用吳茱萸植物資源及其質(zhì)量評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；本文所建立的HPLC方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好。其中，密果吳萸和臭辣吳萸與正品吳茱萸相比，主要成分一致，含量總體低于正