擬桿菌16SrRNA基因在飲用水污染溯源方法中的應(yīng)用研究.pdf

1、微生物溯源是通過比較污染樣品與可能污染源中的糞便污染指示微生物的差異或其生物標(biāo)記的有無來判斷污染樣品和可能污染源之間存在的聯(lián)系,從而確定污染來源的一種技術(shù)。傳統(tǒng)的溯源方法操作復(fù)雜,耗時(shí)長(zhǎng)。本研究建立了一種基于擬桿菌群體特異性16S rRNA基因進(jìn)行溯源的PCR—DGGE方法,以期達(dá)到快速、準(zhǔn)確進(jìn)行污染溯源的目的。同時(shí)與已報(bào)道的另一種新的快速溯源方法——利用大腸桿菌特異性基因的PCR-DGGE技術(shù),進(jìn)行了比較研究。
　　 通過三次

2、采集示范點(diǎn)水樣進(jìn)行微生物指標(biāo)的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)存在大腸菌群嚴(yán)重超標(biāo)的現(xiàn)象,而大腸桿菌作為糞便污染的指示菌,這種現(xiàn)象說明了示范點(diǎn)飲用水遭受到了糞便的污染。
　　 進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)后最終確定了利用擬桿菌進(jìn)行DGGE分析過程中的實(shí)驗(yàn)條件為采用聚丙烯酰胺凝膠濃度為8％,變性梯度為35％-65％,在60V電壓條件下,電泳12h。
　　 通過分析研究建立了利用擬桿菌進(jìn)行糞便污染溯源的方法,水樣中的微生物通過濾膜收集,液氮研磨濾膜后采用CT

3、AB的方法提取水樣總DNA,采用擬桿菌特異性引物Bac32F／Bac708R將擬桿菌的DNA從水體中分離出來后,隨后采用巢式PCR利用16S rRNA上的V3區(qū)將樣品中的群體差異性表現(xiàn)出來進(jìn)行不同樣品之間相似性的區(qū)分。該方法針對(duì)采集的兩批示范點(diǎn)水樣進(jìn)行了方法的驗(yàn)證,結(jié)果與實(shí)際情況相符。
　　 本研究建立的利用擬桿菌特異性引物PCR-DGGE溯源的方法首次通過擬桿菌群體差異分析進(jìn)行微生物溯源,有效地確定水體中污染來源,結(jié)果可靠。利

4、用另一種較為快速的溯源方法——大腸桿菌特異性基因的PCR-DGGE方法對(duì)采集的水樣中進(jìn)行方法的比較,結(jié)果證明本研究建立的方法在實(shí)際過程中其結(jié)果穩(wěn)定、具有很強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值。
　　 擬桿菌作為糞便污染的指示微生物之一,水體中檢測(cè)到擬桿菌的存在說明飲用水受到糞便的污染,微生物溯源的研究結(jié)果表明飲用水與周圍池塘的樣品之間表現(xiàn)出極大的相似性,說明周圍池塘水造成了飲用水的污染。井水作為華南地區(qū)典型農(nóng)村飲用水來源之一,這類飲用水可能正遭受著池塘