云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲(chóng)的分類研究.pdf

1、目的：運(yùn)用形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)方法，鑒定云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲(chóng)的種類，進(jìn)一步明確該地區(qū)是否存在亞洲帶絳蟲(chóng)，并為云南省帶絳蟲(chóng)的分類研究和帶絳蟲(chóng)病的防治提供科學(xué)的參考依據(jù)。 方法：（1）形態(tài)學(xué)鑒定：選取云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)的頭節(jié)、成節(jié)和孕節(jié)節(jié)片，采用鹽酸卡紅和孔雀綠溶液進(jìn)行染色，并與標(biāo)準(zhǔn)株豬帶絳蟲(chóng)、傳統(tǒng)牛帶絳蟲(chóng)進(jìn)行對(duì)照，對(duì)香格里拉地區(qū)帶絳蟲(chóng)的種類進(jìn)行初步的形態(tài)學(xué)鑒定。（2）分子生物學(xué)鑒定：從云南省香格里拉地區(qū)采集的帶絳蟲(chóng)成蟲(chóng)

2、標(biāo)本，剪取孕節(jié)節(jié)片，采用酚—氯仿法抽提DNA，PCR擴(kuò)增rDNA—ITS1區(qū)段，克隆此片段后做序列測(cè)定及分析；結(jié)合GenBank中已知的臺(tái)灣、貴州省都勻亞洲帶絳蟲(chóng)，貴州省從江傳統(tǒng)牛帶絳蟲(chóng)、豬帶絳蟲(chóng)rDNA—ITS1序列，應(yīng)用CLUSTALX（1.83）和DNAMAN（Version5.2.2）軟件對(duì)各標(biāo)本測(cè)序結(jié)果進(jìn)行同源性分析，計(jì)算遺傳距離并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)狀圖。 結(jié)果：（1）形態(tài)學(xué)分析結(jié)果提示，云南省香格里拉地區(qū)帶絳蟲(chóng)標(biāo)本的頭節(jié)

3、均略呈方形，具有四個(gè)吸盤(pán)，無(wú)頂突和小鉤；成節(jié)卵巢分兩葉，即左右兩葉；孕節(jié)的子宮分支大致對(duì)稱，每側(cè)約15～25支。（2）根據(jù)PCR擴(kuò)增后ITS1測(cè)序結(jié)果，香格里拉地區(qū)的帶絳蟲(chóng)標(biāo)本與GenBank中的亞洲帶絳蟲(chóng)序列基本一致，同源性分別為99%和100%；與傳統(tǒng)牛帶絳蟲(chóng)同源性98%；與豬帶絳蟲(chóng)同源性92%。構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示：香格里拉地區(qū)的帶絳蟲(chóng)標(biāo)本先和臺(tái)灣、都勻亞洲帶絳蟲(chóng)聚類，再和從江傳統(tǒng)牛帶絳蟲(chóng)相聚，最后和豬帶絳蟲(chóng)形成姊妹群關(guān)系。