弱精子癥患者精子蛋白的研究.pdf

1、不育癥是全球性的醫(yī)學(xué)難題和社會問題，據(jù)統(tǒng)計(jì)世界范圍內(nèi)大約有10％～20％的已婚夫婦遭遇生育困難，而由于男性生殖能力異常所致的不育幾近50％。男性不育與精子活力低下(弱精子癥)、精子密度減少(少精子癥)和精子形態(tài)異常(畸形精子癥)有關(guān)，其中弱精子癥是引起男性生育力低下和不育癥的最主要因素。精子活力對于正常生育力的維持至關(guān)重要，但對于精子蛋白及其功能的基礎(chǔ)研究卻較為薄弱。蛋白質(zhì)組學(xué)及技術(shù)是新世紀(jì)最具有價(jià)值的生命科學(xué)研究手段之一，它應(yīng)用生物化

2、學(xué)與分子生物學(xué)方法對蛋白質(zhì)進(jìn)行高效和大規(guī)模地分析，將其運(yùn)用在精子蛋白差異表達(dá)和與不育癥相互關(guān)系的研究后，已取得了令人振奮的成果。 本研究課題旨在應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)開展特發(fā)性弱精子癥患者與正常供精者的精子差異表達(dá)蛋白的比較研究，同時我們也試圖運(yùn)用該技術(shù)尋找調(diào)節(jié)精子活力的特異蛋白。首先通過病史采集、查體和計(jì)算機(jī)輔助的精液常規(guī)質(zhì)量分析篩選出90例特發(fā)性弱精子癥患者，并按照精子活動力分級將其分為輕度、中度、重度三組(每組各30例)，正常

3、供精者標(biāo)本30例作為對照。然后抽提全精子蛋白質(zhì)，運(yùn)用SDS-PAGE電泳分離，并進(jìn)行凝膠染色，初步分辨差異表達(dá)的蛋白條帶。采用經(jīng)典的未知蛋白鑒定路線，應(yīng)用Westerll Blotting免疫印跡技術(shù)鑒定了差異蛋白DDX4，該蛋白是DExH/D蛋白家族重要成員VASA的人類同源體。結(jié)果顯示各實(shí)驗(yàn)組之間DDX4蛋白的表達(dá)存在顯著性差異(P<0.05)，弱精子癥患者該蛋白的表達(dá)明顯少于正常對照組，這種差異表達(dá)提示DDX4與不育癥關(guān)系密切。我