玫瑰微體快繁技術(shù)體系的建立.pdf

1、本文以玫瑰帶腋芽莖段和幼嫩葉片為外植體，對玫瑰組織培養(yǎng)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。旨在建立可用于工廠化繁殖的玫瑰微體快繁技術(shù)體系，并為玫瑰的分子育種及相關(guān)研究提供技術(shù)支持。 一、在以玫瑰帶腋芽莖段為外植體的微體快繁技術(shù)體系的建立中，文章對外植體的取材時間、不同滅菌處理方案的滅菌效果、外植體的褐變現(xiàn)象及不同培養(yǎng)階段的褐變控制方法、組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)條件對組培苗的影響、多酚含量及多酚氧化酶活性與玫瑰組培苗褐變及生根的關(guān)系、馴化處理與移栽基質(zhì)對

2、移栽成活率的影響以及玫瑰組織培養(yǎng)的最佳初代、增殖、生根培養(yǎng)基等都進(jìn)行了系統(tǒng)、細(xì)致的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 1．玫瑰組織培養(yǎng)的最佳取材時間是4月份。該時期外植體的污染率最低，啟動率最高。 2．以4月份的帶腋芽莖段為外植體，最佳滅菌處理方案為T5處理，即75％乙醇1min+0.1％升汞(添加吐溫-20)10min。 3．植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對不同玫瑰品種初代接種啟動率和平均生長量的影響均呈相同的變化規(guī)律。MS+6-BA0.5

3、mg/L+NAA0.1mg/L+GA，0.4．mg/L為玫瑰初代培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基。 4．玫瑰不同品種、同一品種不同芽位的外植體在組培中褐變發(fā)生情況不同，但不同品種芽位的褐變度均呈“V”型變化，且峰值均在第4芽。1.5 g/L活性碳(AC)是初代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)的最佳褐變抑制劑。0.2/L抗壞血酸(Vc)是增殖培養(yǎng)的最佳褐變抑制劑。添加AC的培養(yǎng)基中，組培苗的生長勢強(qiáng)，葉色油綠，光澤好，苗木木質(zhì)化程度相對較高，AC起到了壯苗的作用。

4、 5．植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對不同玫瑰品種組培苗的苗高和增殖有相同趨勢的影響。適宜濃度的6-BA對玫瑰組培苗的增殖系數(shù)和苗高均有顯著的促進(jìn)作用，6-BA是影響玫瑰組培苗增殖的主要因素；NAA不是影響組培苗增殖的主要因素；GA3是影響組培苗增殖的重要因素。：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.05 mg/L+GA<,3>0.8 mg/L是玫瑰增殖培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。 6．適宜的光照強(qiáng)度是玫瑰組培苗正常生長的必要條件。2000～

5、 3000LUX的光照強(qiáng)度是玫瑰組培的最佳光強(qiáng)范圍。2000LUX的光強(qiáng)是保證組培苗正常生長的最低光照強(qiáng)度。3000LUX的光強(qiáng)是保證組培苗具有較高增殖系數(shù)的最高光照強(qiáng)度。 7．從第6次繼代開始，組培苗的增殖系數(shù)開始下降，此后隨著繼代次數(shù)的增多，組培苗的增殖系數(shù)持續(xù)下降。玫瑰工廠化繁殖過程中，必須定期對用于增殖培養(yǎng)的組培苗進(jìn)行更新。 8．玫瑰組培苗的褐變度對其生根指數(shù)有極顯著負(fù)影響。不同玫瑰品種間的多酚含量、PPO活性與

6、生根指數(shù)存在極顯著差異。多酚含量與生根指數(shù)顯著負(fù)相關(guān)，PPO活性與生根指數(shù)極顯著負(fù)相關(guān)，PPO活性對組培苗生根的影響相對較大。玫瑰組培苗的PPO活性及生根指數(shù)與pH均有密切聯(lián)系，PPO的最適pH為6.5，而其生根的最適pH為5.5。 9．NAA對不同玫瑰品種組培苗生根有相同趨勢的極顯著影響。在試驗(yàn)所設(shè)置的濃度范圍內(nèi)IBA對組培苗生根的影響小于NAA。1/2MS+NAA0.2 mg/L+IBA0.5mg/L+AC1.5g/L為玫瑰

7、組培苗生根的最佳培養(yǎng)基。 10．馴化處理可顯著提高組培苗的移栽成活率，是玫瑰組培苗移栽前必不可少的過程。珍珠巖：蛭石：草炭=1：2：1的基質(zhì)是玫瑰組培苗移栽的最佳基質(zhì)。 二、在以玫瑰幼嫩葉片為外植體的愈傷組織誘導(dǎo)及不定芽再生體系的建立中，文章對玫瑰葉片愈傷組織發(fā)生的動態(tài)過程進(jìn)行了詳細(xì)的描述，對暗培養(yǎng)、葉片接種部位、葉片接種方向、不同植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對葉片愈傷組織誘導(dǎo)的影響以及不同植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、暗培養(yǎng)對不定芽再生的影響

8、，都進(jìn)行了細(xì)致的研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)： 1．離體葉片接種20d左右基部葉塊的葉柄處，首先產(chǎn)生少量黃綠色愈傷組織，在隨后的培養(yǎng)中愈傷組織逐漸分化為三種不同的類型，其中黃綠色、致密、顆粒狀愈傷組織不需繼代培養(yǎng)即可在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上分化出不定芽。 2．暗培養(yǎng)對接種葉片愈傷組織誘導(dǎo)有很大的影響。在本試驗(yàn)條件下，愈傷組織誘導(dǎo)的最佳暗培養(yǎng)時間為3w。 3．同一葉片的不同部位再生愈傷組織的能力不相同。不同部位的再生能力依次為：葉基

9、>葉中>葉尖。 4．葉片接種方向?qū)τ鷤M織的誘導(dǎo)無明顯影響。 5．2，4-D是影響玫瑰葉片愈傷組織誘導(dǎo)率和愈傷組織生長量的主要因素；6-BA是影響愈傷質(zhì)量的主要因素。誘導(dǎo)玫瑰葉片愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA0.5 mg/L。 6．暗培養(yǎng)不是玫瑰葉片愈傷組織再生不定芽的必要因素，但適當(dāng)?shù)陌蹬囵B(yǎng)有利于不定芽的再生。 7．植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對玫瑰愈傷組織不定芽再生有很大的影響，F(xiàn)