加味滌痰湯對MCI模型大鼠行為學及NO含量和TNOS活力影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　通過結(jié)扎大鼠右側(cè)頸總動脈方法制備MCI模型，用相應(yīng)藥物處理5周之后，觀察各組模型大鼠的行為學表現(xiàn)，并測定該模型大鼠皮質(zhì)中NO含量和TNOS活力。通過與其他各組相關(guān)指標的對比，評價加味滌痰湯對MCI模型大鼠學習記憶能力的影響。
　　方法:
　　1.大鼠分組及模型制備
　　2月齡SPF級SD大鼠60只，雌雄各半，采用隨機分組法分為5組，即空白組、模型組、假手術(shù)組、加味滌痰湯組、尼莫地平組，每組12只。除空

2、白組外，其余各組采用結(jié)扎右側(cè)頸總動脈方法制備MCI模型，其中假手術(shù)組僅尋找到右側(cè)頸總動脈但不予結(jié)扎。加味滌痰湯組、尼莫地平組于第5周開始灌胃給藥，余下三組生理鹽水灌胃。灌胃5周后開始行相關(guān)指標檢測。加味滌痰湯組方（天南星10g、丹參10g、川芎10g、石菖蒲6g、法夏10g、甘草6g、人參6 g、枳實10g、茯苓15g、橘紅10g、竹茹10g、生姜5g）。
　　2.各組大鼠行為學檢測
　　Morris水迷宮定位航行實驗:將M

3、orris水迷宮分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四個象限，將大鼠面向池壁從第一象限投放入水中，記錄其在限定時間(2分鐘)之內(nèi)找到平臺所用的時間（逃避潛伏期）。歷時5天，每日2次（其中前4天為訓練期，第5天為檢測期）。
　　Morris水迷宮空間探索實驗:定位航行檢測結(jié)束后，將Morris水迷宮中的平臺移出，仍然與定位航行訓練相同入水點將大鼠投放入水中，記錄其在限定時間（2分鐘）內(nèi)游行軌跡，觀察大鼠跨越原放置平臺位置次數(shù)、靠近平臺區(qū)域時間。歷時4

4、天，每日2次（其中前3天為訓練期，第4天為檢測期）。
　　物體識別實驗:訓練期間測試箱內(nèi)放入A套物體，將大鼠放于兩物體之間等間距處，迅速關(guān)好測試箱，記錄大鼠在每個物體上探索的時間（大鼠用鼻子接觸物體，或大鼠鼻尖距離物體1cm范圍內(nèi)，如果大鼠趴在物體上或者僅僅在物體1cm之外處游走則不計入）。測試期內(nèi)，將測試箱內(nèi)其中一個物體拿走，原位置處放入B套中的一個物體，大鼠放入方法同前，記錄大鼠探求新鮮物體和熟悉物體的時間。記錄第四天大鼠總探

5、求時間，第五天為檢測期，記錄大鼠探求新鮮物體所花時間(N)和探求熟悉物體所花時間(F)，并依據(jù)公式計算辨別指數(shù)(discrimination index，DI)。
　　3.大鼠皮質(zhì)中NO含量和TNOS活力檢測:
　　行為學檢測結(jié)束后，斷頭處死各組大鼠，將鼠頭放置于冰盤上，逐層剝離出海馬和皮質(zhì)，再分別取出海馬和皮質(zhì)，置于不同標記的EP管內(nèi)，迅速投于液氮瓶中暫存，之后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱中保存待檢。檢測時，取適量的皮質(zhì)，用9倍于該

6、量的生理鹽水研磨，然后將研磨液置于臺式離心機中以3000轉(zhuǎn)/分速度離心10分鐘，吸取上清液，放在4℃冰箱保存待檢。再嚴格按照南京建成生物工程研究所提供的一氧化氮和一氧化氮合酶試劑盒檢測方法檢測皮質(zhì)中的NO含量及TNOS活力。
　　結(jié)果:
　　1.Morris水迷宮檢測，比較各組大鼠平均逃避潛伏期、撤掉平臺后跨越原來平臺位置次數(shù)。其中模型組與空白組比較，模型組大鼠平均逃避潛伏期時間較空白組延長，跨越原平臺位置次數(shù)較空白組較少，

7、其差異性有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型組與假手術(shù)組比較，雖然假手術(shù)組大鼠逃避潛伏期時間較模型組縮短，跨越原平臺位置次數(shù)較模型組增多，但二者差異性不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。加味滌痰湯組與模型組比較，雖然加味滌痰湯組大鼠逃避潛伏期時間較模型組縮短，跨越原平臺位置次數(shù)較模型組增多，但二者差異性不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。加味滌痰湯組與尼莫地平組比較，雖然加味滌痰湯組大鼠平均逃避潛伏期、撤掉平臺后跨越原來平臺位置次數(shù)方面有改善

8、趨勢，但其差異性不顯著，沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　2.在物體識別檢測中，其中模型組與空白組比較，模型組大鼠對新舊物體的辨別指數(shù)較空白組下降、總探求時間縮短，其差異性有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型組與假手術(shù)組比較，雖然假手術(shù)組大鼠對新舊物體的辨別指數(shù)較模型組上升、總探求時間延長，但二者差異性不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。加味滌痰湯組與模型組比較，加味滌痰湯組大鼠總探求時間較模型組延長、對新舊物體的辨別指數(shù)上升，二

9、者差異性具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。加味滌痰湯組與尼莫地平組比較，雖然加味滌痰湯組大鼠對新舊物體的辨別指數(shù)上升、總探求時間延長，但其差異性不顯著，沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　3.對各組大鼠皮質(zhì)中NO含量、TNOS活力檢測結(jié)果顯示:其中模型組與空白組比較，模型組大鼠皮質(zhì)中NO含量和TNOS活力較空白組升高，其差異性有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。模型組與假手術(shù)組比較，假手術(shù)組大鼠皮質(zhì)中NO含量和TNOS活力較空白組降低，

10、其差異性有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。加味滌痰湯組與模型組比較，加味滌痰湯組大鼠皮質(zhì)中NO含量和TNOS活力較空白組降低，二者差異性具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。加味滌痰湯組與尼莫地平組比較，二組大鼠皮質(zhì)中NO含量和TNOS活力無顯著性差異，不具有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　本實驗通過結(jié)扎右側(cè)頸總動脈方法制備了MCI大鼠模型，灌胃給藥5周檢測相關(guān)指標。通過對比觀察加味滌痰湯對MCI模型大鼠行為學及皮質(zhì)中N