尾靜脈放血對(duì)CUMS模型大鼠行為學(xué)和海馬NOS變化的影響.pdf

1、研究目的:
　　觀察尾靜脈放血對(duì)慢性不可預(yù)見性應(yīng)激（chronic unpredicted mild stress，CUMS）結(jié)合孤養(yǎng)抑郁模型大鼠行為學(xué)的影響，及其可能的一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)機(jī)制，推廣放血療法的臨床應(yīng)用范圍，為抑郁癥患者提供新的治療方法。
　　研究方法:
　　健康雄性SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，根據(jù)開野實(shí)驗(yàn)(open-field test, OFT)水平運(yùn)動(dòng)

2、路程的結(jié)果選擇得分相近的動(dòng)物33只納入實(shí)驗(yàn)。用標(biāo)記法隨機(jī)將大鼠分為正常組(n=10)和造模組(n=23)，采用CUMS結(jié)合孤養(yǎng)21天建立抑郁模型大鼠，正常組不干預(yù);將造模成功的20只按OFT水平運(yùn)動(dòng)路程分層隨機(jī)分為模型組和放血組，放血組尾靜脈放血(10滴，3次/周，共14天)，不干預(yù)模型組。治療結(jié)束后，以O(shè)FT結(jié)果評(píng)價(jià)各組大鼠的行為學(xué)，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR方法檢測(cè)各組大鼠海馬內(nèi)皮源型一氧化氮合酶(endothelial N

3、OS，eNOS) mRNA、誘導(dǎo)源型一氧化氮合酶(inducible NOS，iNOS) mRNA、神經(jīng)源型一氧化氮合酶(neural NOS，nNOS) mRNA的表達(dá)結(jié)果，免疫組織化學(xué)方法(immunohistochemistry，IHC)和免疫印跡(Western Blot，WB)方法檢測(cè)各合酶蛋白表達(dá)水平:IHC觀察陽(yáng)性沉積物的分布和所檢查指標(biāo)的表達(dá)面積及平均光密度，用WB觀察各合酶電泳條帶寬度，并對(duì)其灰度值進(jìn)行分析。
　

4、　研究結(jié)果:
　　1.造模后行為學(xué)檢測(cè):與正常組相比，造模組水平運(yùn)動(dòng)路程、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)、向中心探索次數(shù)和理毛次數(shù)顯著減少(P＜0.01)，大便粒數(shù)與正常組比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示CUMS結(jié)合孤養(yǎng)可以成功復(fù)制抑郁模型大鼠。
　　2.治療后行為學(xué)檢測(cè):與正常組比較，模型組水平運(yùn)動(dòng)路程、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)、向中心探索次數(shù)和理毛次數(shù)均減少(P＜0.01)，放血組理毛次數(shù)下降(P＜0.05);與模型組比較，放血組的水平運(yùn)動(dòng)距

5、離、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)及向中心探索次數(shù)均升高(P＜0.05);各組間大便粒數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示放血療法可以改善CUMS模型大鼠的行為學(xué)。
　　3.各組大鼠海馬NOS表達(dá)測(cè)定:
　　1) eNOS RT-PCR檢測(cè):模型組大鼠海馬eNOS mRNA較正常組下降，放血使之升高;IHC檢測(cè):與正常組eNOS的表達(dá)面積和平均光密度相比，模型組和放血組大鼠海馬eNOS明顯降低(P＜0.01)，且與模型組相比，放血組大鼠有

6、所回升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001); WB檢測(cè):與正常組相比，模型組和放血組大鼠海馬eNOS/GAPDH的灰度值均下降(P＜0.05)，但放血組eNOS/GAPDH陽(yáng)性表達(dá)值降低幅度較模型組小，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。提示尾靜脈放血可以使CUMS模型大鼠海馬eNOS陽(yáng)性表達(dá)升高，但升高后水平仍不及正常組。
　　2) iNOS RT-PCR檢測(cè):模型組大鼠海馬iNOS mRNA較正常組升高，放血使之降低;I

7、HC檢測(cè):與正常組iNOS的表達(dá)面積和平均光密度相比，模型組大鼠海馬iNOS表達(dá)升高(P＜0.001)，放血組亦升高(P＜0.05)，但升高幅度不及模型組(P＜0.001);WB檢測(cè):模型組的iNOS/GAPDH陽(yáng)性表達(dá)值顯著高于正常組(P＜0.01)，放血組一定程度上降低了抑郁模型大鼠海馬iNOS的含量，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，放血組降低后的iNOS蛋白表達(dá)較正常組增加(P＜0.05)。提示尾靜脈放血可以降低C

8、UMS模型大鼠海馬iNOS表達(dá)，但降低后的iNOS水平仍較正常組高。
　　3) nNOS RT-PCR檢測(cè):結(jié)果與eNOS mRNA表達(dá)相一致;IHC檢測(cè):模型組和放血組大鼠nNOS的表達(dá)面積和平均光密度較正常組減少(P＜0.001)，模型組和放血組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05); WB檢測(cè):與正常組比較，抑郁模型大鼠海馬nNOS/GAPDH陽(yáng)性表達(dá)值下降(P＜0.001)，而放血組的灰度值較模型組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

9、0.01)，正常組與放血組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示尾靜脈放血可以升高CUMS模型大鼠海馬nNOS的陽(yáng)性表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.CUMS結(jié)合孤養(yǎng)可以成功建立抑郁動(dòng)物模型，減少大鼠水平運(yùn)動(dòng)距離、垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)及向中心探索次數(shù)，尾靜脈放血有效改善CUMS模型大鼠的行為學(xué)，增加該大鼠模型在開野實(shí)驗(yàn)中的運(yùn)動(dòng)和探索能力。
　　2.CUMS結(jié)合孤養(yǎng)致大鼠抑郁樣行為改變與海馬內(nèi)NOS水平相關(guān):CUMS模型大鼠海馬內(nèi)eN