海馬CB1受體在rTMS改善CUMS模型大鼠抑郁樣行為中的作用.pdf

1、研究目的:
　　本研究的主要目的是應(yīng)用慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(chronicunpredictablemildstress,CUMS)的抑郁模型大鼠進行研究,探討海馬區(qū)域的內(nèi)源性大麻素Ⅰ型受體(cannabinoidtype1receptor,CB1)信號傳遞的改變是否是重復(fù)性經(jīng)顱磁刺激(repetitivetranscranialmagneticstimulation,rTMS)改善CUMS模型大鼠抑郁樣行為的基礎(chǔ)之一。

2、　　研究方法:
　　本研究共分兩部分進行:實驗一為觀察rTMS干預(yù)對CUMS抑郁模型大鼠的抑郁樣行為及海馬CB1受體的影響;實驗二為應(yīng)用CB1受體拮抗劑AM251干預(yù)后,觀察rTMS對CUMS抑郁模型大鼠的抑郁樣行為及海馬神經(jīng)保護與神經(jīng)發(fā)生的影響。
　　在實驗一部分,動物被隨機分為四組:(1)陰性對照組,實驗大鼠常規(guī)飼養(yǎng)3周后,給予rTMS假性刺激1周;(2)對照+rTMS組,實驗大鼠常規(guī)飼養(yǎng)3周后,給予rTMS干預(yù)1周;(

3、3)CUMS模型組,實驗大鼠給予CUMS處理3周,之后給予rTMS假性刺激1周;(4)CUMS+rTMS組,實驗大鼠給予CUMS處理3周,之后給予rTMS治療1周。
　　在實驗二部分,動物被隨機分為六組:(1)陰性對照組,實驗大鼠常規(guī)飼養(yǎng)3周后,給予rTMS假性刺激1周;(2)CUMS模型組,實驗大鼠給予CUMS處理3周,之后給予rTMS假性刺激1周;(3)CUMS+rTMS組,實驗大鼠給予CUMS處理3周,之后給予rTMS治療1

4、周;(4)CUMS+rTMS+AM251組,實驗大鼠給予CUMS處理3周,之后給予rTMS治療1周,并在每次治療前30min腹腔注射AM251,注射劑量為1mg/kg;(5)CUMS+AM251組,實驗大鼠給予CUMS處理3周,之后給予rTMS假性刺激1周,并在每次假性刺激前30min腹腔注射AM251,注射劑量為1mg/kg;(6)CUMS+rTMS+對照溶劑組,實驗大鼠給予CUMS處理3周,之后給予rTMS治療1周,并在每次治療前3

5、0min腹腔注射生理鹽水,注射劑量為0.6ml/kg(DMSO:生理鹽水=1:4)。
　　觀察指標(biāo)包括兩個方面:1.行為學(xué)觀察包括糖水偏好實驗、強迫游泳實驗和曠場實驗;2.海馬CB1受體的表達及海馬神經(jīng)保護與神經(jīng)發(fā)生的觀察,采用免疫組織化學(xué)方法及蛋白質(zhì)印跡法(Westernblot)進行檢測。
　　結(jié)果:
　　在實驗一部分,實驗動物經(jīng)CUMS處理后出現(xiàn)抑郁樣行為并且海馬CB1受體的表達下調(diào);而經(jīng)rTMS治療后,抑郁模型

6、大鼠的抑郁樣行為得到改善并且海馬CB1受體的表達上調(diào)。具體結(jié)果如下:
　　1.與陰性對照組相比,CUMS處理后大鼠的糖水偏好值減小(P<0.05);強迫游泳不動時間延長(P<0.01);在曠場實驗中的水平運動距離減少(P<0.01),進入中央?yún)^(qū)次數(shù)減少(P<0.01);免疫組織化學(xué)染色及Westernblot檢測結(jié)果均表明海馬CB1受體表達下調(diào)(P均<0.01)。
　　2.與CUMS組相比,經(jīng)rTMS治療后大鼠的糖水偏好值增

7、加(P<0.05);強迫游泳不動時間減少(P<0.05);在曠場實驗中的水平運動距離增加(P<0.05),進入中央?yún)^(qū)次數(shù)增多(P<0.05);免疫組織化學(xué)染色及Westernblot檢測結(jié)果均表明海馬CB1受體表達下調(diào),(P均<0.01)。
　　在實驗二部分,我們發(fā)現(xiàn)rTMS治療能促進CUMS模型大鼠海馬的神經(jīng)發(fā)生與神經(jīng)保護,而應(yīng)用CB1受體拮抗劑AM251不僅可以阻斷rTMS的這一效應(yīng),而且還抑制了rTMS的抗抑郁效應(yīng)。具體結(jié)果

8、如下:
　　1.與CUMS+rTMS組相比,CUMS+rTMS+AM251組大鼠的糖水偏好值減小(P<0.05);強迫游泳不動時間延長(P<0.05);在曠場實驗中,水平運動距離減少(P<0.05),進入中央?yún)^(qū)次數(shù)減少(P<0.05)。CUMS+rTMS組與CUMS+rTMS+對照溶劑組上述各指標(biāo)的比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);CUMS組,CUMS+rTMS+AM251組與CUMS+AM251組上述各指標(biāo)的比較亦無統(tǒng)計學(xué)差異

9、(P>0.05)。
　　2.與CUMS組相比,經(jīng)rTMS治療后大鼠的海馬BrdU陽性細胞數(shù)目增多(P<0.01);BDNF表達上調(diào)(P<0.05);Bcl-2表達上調(diào)(P<0.05);Bax表達下調(diào)(P<0.05);與CUMS+rTMS組相比,CUMS+rTMS+AM251組大鼠的海馬BrdU陽性細胞數(shù)目減少(P<0.01);BDNF表達下調(diào)(P<0.01);Bcl-2表達下調(diào)(P<0.01);Bax表達上調(diào)(P<0.05);CU

10、MS+rTMS組與CUMS+rTMS+對照溶劑組相比,大鼠的海馬BrdU陽性細胞數(shù)目、BDNF、Bcl-2、Bax的表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);CUMS組,CUMS+rTMS+AM251組與CUMS+AM251組相比,大鼠的海馬BrdU陽性細胞數(shù)目、BDNF、Bcl-2、Bax的表達無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　CUMS模型大鼠會表現(xiàn)出類似于抑郁癥患者的抑郁樣行為,而rTMS治療能改善這種行為表現(xiàn),但