脊髓背角CB1受體在神經(jīng)病理性疼痛中的作用及機制研究.pdf

1、大麻素作為一種重要的神經(jīng)活性物質(zhì)，參與了機體的許多生理及病理過程的調(diào)節(jié)。近年研究發(fā)現(xiàn)，全身給予、鞘內(nèi)注射或直接向炎性組織局部注射大麻素類物質(zhì)，對各種急慢性疼痛、炎性疼痛和神經(jīng)痛均有明顯的鎮(zhèn)痛作用。大麻素受體主要包括CB1受體(Cannabinoid receptor1，CB1R)和CB2受體(Cannabinoid receptor2，CB2R)兩種亞型，與其內(nèi)源性激動劑共同構(gòu)成了內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)。近年研究表明，CB1R和CB2R在疼痛

2、的調(diào)制過程中都發(fā)揮了重要作用，介導了大麻素類物質(zhì)的鎮(zhèn)痛效應。
　　脊髓背角既是接受外周傷害性信息并向上位腦結(jié)構(gòu)傳遞的中繼站，又是調(diào)制傷害性信息傳遞的腦干下行抑制/易化系統(tǒng)的投射纖維的終止部位，對傷害性信息的傳遞和調(diào)制發(fā)揮著重要的作用。外周神經(jīng)損傷后導致脊髓背角感覺神經(jīng)元興奮性增高是神經(jīng)病理性疼痛的關(guān)鍵。免疫組化實驗顯示在外側(cè)網(wǎng)狀核和脊髓腰段背角都有大量CB1R分布，CB1R是否通過調(diào)節(jié)脊髓背角神經(jīng)元的興奮性從而影響傷害性信息的傳遞

3、以及中樞痛敏的形成，尚不清楚。
　　目的：觀察脊髓背角神經(jīng)元 CB1R在神經(jīng)病理性疼痛中的作用；闡明 CB1R影響脊髓背角神經(jīng)元的興奮性及其機制。
　　方法：8周齡雄性SD大鼠56只分為7組：①sham組(假手術(shù)組)，②CCI組(鞘內(nèi)注射DMSO生理鹽水)，③AM251+CCI組（鞘內(nèi)注射10-8mol/L AM251），④~⑥CP55940（0.01，0.05，0.20mg/kg）+CCI組（鞘內(nèi)注射0.01，0.05，0

4、.20mg/kg CP55940），⑦AM251+CP55940+CCI組（預先鞘內(nèi)注射10-8mol/L AM251，10min后給予0.05mg/kg CP55940）；每組8只。假手術(shù)組大鼠不進行鞘內(nèi)置管，僅游離坐骨神經(jīng)不結(jié)扎；其余各組大鼠在鞘內(nèi)置管5天后行 CCI術(shù)，術(shù)后分別鞘內(nèi)給予各種藥物。行為學檢測（熱痛閾測定）；形態(tài)學檢測（免疫組織化學）；免疫印跡技術(shù)檢測脊髓背角CB1R、PKA蛋白；培養(yǎng)脊髓背角神經(jīng)元，激光共聚焦技術(shù)測定

5、脊髓背角神經(jīng)元[Ca2+]i。
　　結(jié)果：
　?。?）大鼠CCI術(shù)后1d即形成穩(wěn)定的熱痛敏，直到第14d熱痛敏仍持續(xù)存在，TWL明顯縮短；鞘內(nèi)注射 CB1R激動劑 CP559400.05mg/kg可明顯延長 CCI大鼠 TWL(P<0.05）；CB1R拮抗劑 AM251(10-8mol/L)可部分阻斷 CP55940的鎮(zhèn)痛效果（P<0.05）。免疫印跡實驗結(jié)果顯示，CCI組大鼠在術(shù)后7、14 d術(shù)側(cè)脊髓背角CB1R、PKA表

6、達明顯增加（P<0.05）；鞘內(nèi)給予CP55940可顯著降低CCI大鼠的PKA表達（P<0.05）；CB1R拮抗劑AM251顯著降低了CCI大鼠的CB1R表達（P<0.05），同時阻斷了CP55940降低CCI大鼠PKA表達的效應（P<0.05）。
　?。?）ATP(50μmol/L)可導致脊髓背角神經(jīng)元[Ca2+]i升高,是由 P2X受體介導細胞外Ca2+內(nèi)流所致; CP55940(1-100nmol/L)可抑制ATP(50μm

7、ol/L)引起的脊髓背角神經(jīng)元[Ca2+]i增高，且呈現(xiàn)劑量依賴性；大麻素受體1（CB1R）選擇性拮抗劑 AM251（10μmol/L）可阻斷 CP55940對ATP引起的[Ca2+]i升高的抑制作用（P<0.01），而CB2R拮抗劑AM630（10μmol/L）不能阻斷CP55940的抑制效應（P<0.01）。
　　結(jié)論：鞘內(nèi)注射大麻素類藥物CP55940對CCI所致的神經(jīng)痛具有良好的鎮(zhèn)痛效應，CB1R可能通過抑制PKA的活性參