CB1受體在慢性間歇低氧大鼠模型骨代謝異常中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　觀察內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)(ECs)中大麻素受體1（CB1R)在骨組織中的表達(dá)情況及干預(yù)后CB1R表達(dá)的變化趨勢(shì)并行骨源性TRAP酶含量測(cè)定，探討使用CB1R拮抗劑利莫那班干預(yù)后能否減輕CIH大鼠發(fā)生骨代謝紊亂及骨結(jié)構(gòu)異常的風(fēng)險(xiǎn)。
　　方法：
　　選取48只雄性SD大鼠，建立OSAS典型的病理模型-慢性間歇低氧（CIH）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，按不同的暴露方法及循環(huán)時(shí)間隨機(jī)均分為6組，即4、6W低氧組（IH），4、6W對(duì)照

2、組（ON），4、6W低氧干預(yù)組（HI），其中HI組在造模前給予腹腔注射CB1R拮抗劑1.5mg/kg/d進(jìn)行低氧干預(yù)。在實(shí)驗(yàn)的4、6W時(shí)隨機(jī)抽取一半大鼠終止實(shí)驗(yàn)，采取股靜脈血5ml，靜置1h經(jīng)離心機(jī)離心取上清血清行TRAP含量的測(cè)定方法采用ELASA法；然后截取各組大鼠骨組織，用脫鈣液浸泡至組織變軟后，經(jīng)石蠟機(jī)包埋后在切片機(jī)下切成厚薄均一的骨組織放于載玻片上，進(jìn)行HE染色，于光鏡下觀察骨微結(jié)構(gòu)有無(wú)變化；骨組織CB1R的表達(dá)情況使用免疫組

3、化法觀察并測(cè)定。
　　結(jié)果：
　　（1）TRAP測(cè)定：造模后，4W及6W-IH組TRAP水平均高于造模前的4、6W-ON組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(t=-7.930，P＜0.001)，而ON組之間TRAP活性水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-1.273，P=0.224）；干預(yù)后，4W及6W-HI組TRAP水平均低于干預(yù)前的4、6W-IH組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(t=-7.930，P＜0.001)，以上結(jié)果提示增加低氧時(shí)間后TRAP水平可較

4、正常時(shí)升高，而采取干預(yù)措施后，TRAP水平會(huì)隨干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低，統(tǒng)計(jì)存在明顯差異性（P＜0.001）。
　?。?）骨組織HE染色：ON組可見形態(tài)正常的骨細(xì)胞，觀察到了結(jié)構(gòu)與數(shù)目保持完整的骨小梁；4IH組骨細(xì)胞出現(xiàn)輕微的水腫，骨小梁的數(shù)目有缺失，結(jié)構(gòu)遭到破壞；4HI組骨細(xì)胞形態(tài)變化、骨小梁數(shù)量和結(jié)構(gòu)破壞稍有好轉(zhuǎn)，以上提示4、6W-ON組之間骨細(xì)胞形態(tài)、骨小梁數(shù)量結(jié)構(gòu)均無(wú)明顯變化，若增加低氧時(shí)間，6IH組骨細(xì)胞較4IH形態(tài)變化

5、嚴(yán)重，骨小梁數(shù)量及結(jié)構(gòu)損傷范圍較前廣泛，而增加干預(yù)時(shí)間后，6HI組骨細(xì)胞形態(tài)變化及骨小梁結(jié)構(gòu)紊亂程度較4HI有所緩解。
　　（3）骨組織中CB1R的表達(dá)情況：①?gòu)溺R下觀察到骨組織ON組CB1R陽(yáng)性表達(dá)位于成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞及骨髓基質(zhì)細(xì)胞的胞漿及胞核中。②在IH組觀察到陽(yáng)性骨細(xì)胞CB1R表達(dá)范圍較ON組廣，而經(jīng)過(guò)干預(yù)后HI組骨細(xì)胞CB1R表達(dá)范圍較IH組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。③ON組之間骨細(xì)胞CB1R表達(dá)水平差異無(wú)

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；延長(zhǎng)低氧時(shí)間后，IH組骨細(xì)胞CB1R表達(dá)區(qū)域增大；干預(yù)時(shí)間增長(zhǎng)后，HI組CB1R表達(dá)水平降低，統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義(P＜0.001)。
　?。?）相關(guān)性分析：Pearson相關(guān)分析顯示破骨細(xì)胞及成骨細(xì)胞CB1R的表達(dá)率與骨代謝標(biāo)志物TRAP活性水平之間均存在正相關(guān)性(OC：r值為0.836，P＜0.001， OB：r值為0.806，P＜0.001）。
　　結(jié)論：
　　明確了ECs的紊亂的發(fā)生與CIH引起骨代謝及骨結(jié)