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1、1-脫氧野尼霉素(1-deoxynojirimycin)是桑葉中的一種哌啶生物堿,其化學(xué)名稱是3,4,5.三羥基-2-羥甲基四氫吡啶,分子式為C6H13NO4,分子量為163。DNJ作為α-葡萄糖苷酶的抑制劑,具有降血糖、抗病毒、抗腫瘤轉(zhuǎn)移等作用。另外,DNJ還是α-葡萄糖淀粉酶的有效抑止劑。 本試驗(yàn)利用DNJ與糖類的相似性,按照常用的用氣相色譜法測(cè)定糖類物質(zhì)進(jìn)行的衍生化方式,將DNJ的羥基進(jìn)行乙酰化反應(yīng),探索用毛細(xì)管柱氣相色譜
2、法測(cè)定桑葉中DNJ的含量,并比較了陜西省蠶桑絲綢研究所品種桑園中種植的110個(gè)桑品種不同時(shí)期采集葉片中DNJ含量的高低。結(jié)果表明,用毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定桑葉中的DNJ含量是可取的,不同品種不同采集時(shí)間的桑葉樣品中DNJ的含量有一定差別。 本實(shí)驗(yàn)考察了不同溶劑和不同提取方式對(duì)桑葉中DNJ提取的影響,選用甲醇、蒸餾水、吡啶等不同試劑對(duì)DNJ進(jìn)行提取,提取方式分別嘗試了震蕩、加熱、超聲提取。最終確定用吡啶作為提取試劑在超聲波條件下處
3、理30分鐘為毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定DNJ的最佳提取條件。同時(shí)考察了衍生化條件對(duì)該試驗(yàn)的影響,考察內(nèi)容包括衍生化試劑、衍生化時(shí)間、衍生化溫度等內(nèi)容。最終確定在用醋酸苷作為乙?;噭?,鹽酸羥胺作為催化劑,在水浴90℃條件下乙酰化30分鐘為最佳衍生化條件。 本試驗(yàn)還考察了不同色譜條件對(duì)DNJ測(cè)定的影響,考察內(nèi)容包括色譜柱選擇、柱溫、載氣流量進(jìn)樣方式等。最終確定色譜條件為:色譜柱OV-1701,初溫285℃×5min,以10℃/min上升
4、至295℃,維持25min,以20℃/min下降至285℃;氣化室溫度310℃;檢測(cè)口溫度310℃;氫氣流量47mL/min;進(jìn)樣量1μL,火焰離子檢測(cè)器(FID),色譜分析軟件采用GCsolution島津氣相色譜工作站。 本試驗(yàn)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算DNJ含量,該法具有簡(jiǎn)化重復(fù)操作,避免系統(tǒng)誤差等優(yōu)點(diǎn)。試驗(yàn)及計(jì)算后得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=36435x+17225,R2=0.9921。最低檢測(cè)濃度為0.01μg/mL。加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果
5、平均回收率為96.11%,RSD=3.24%(n=5)。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果RSD=2.10%(n=5)。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明:標(biāo)樣及樣品在24小時(shí)內(nèi)基本穩(wěn)定,RSD分別為1.00%和2.56%(n=5)。 用所建立的毛細(xì)管柱氣相色譜法對(duì)陜西省蠶桑絲綢研究所品種桑園中110個(gè)桑品種桑葉中DNJ含量進(jìn)行了測(cè)定。并比較了不同品種在霜前和霜后DNJ含量的高低,結(jié)果顯示,110種桑葉中均含有DNJ。其9月底(霜前)含量在0.059%~0.535
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