兩種Bt毒蛋白對小地老虎的毒力差異及作用機理的研究.pdf

1、蘇云金芽孢桿菌是目前研究最深入、使用最廣泛的殺蟲微生物。小地老虎是世界性農(nóng)業(yè)害蟲，取食廣泛，具有遷飛性，所以對小地老虎的生物防治也非常重要。隨著昆蟲對Bt抗性問題的出現(xiàn)，Bt對昆蟲的作用機理以及昆蟲對Bt的抗性機制是目前研究的熱點。本論文是以小地老虎為實驗試蟲，研究蘇云金芽孢桿菌BtCry1Ac和BtCry2Ab對昆蟲的作用，為更好的了解Bt對小地老虎的作用機制問題奠定了理論基礎。通過研究明確了以下問題： ⑴BtCry2Ab毒蛋

2、白對小地老虎毒性較高，相比較而言BtCry1Ac對小地老虎毒性很低。 ⑵Bt毒素對小地老虎生長發(fā)育影響明顯。小地老虎初孵幼蟲接入含有亞致死劑量毒蛋白的人工飼料后，幼蟲存活率、蟲體重、化蛹率、蛹重和羽化率降低，幼蟲歷期和蛹歷期延長。BtCry2Ab對小地老虎幼蟲生長發(fā)育的抑制作用明顯。說明BtCry2Ab對小地老虎有毒性。 ⑶取食不同Bt毒素后，小地老虎五齡幼蟲體內(nèi)中腸主要蛋白酶活力都發(fā)生了不同程度的變化。取食含有BtCr

3、y2Ab毒蛋白飼料的幼蟲體內(nèi)，中腸總蛋白酶、類胰凝乳蛋白酶與對照相比活性升高；在BtCry2Ab毒蛋白含量達到12μg/g時，中腸氨肽酶活性顯著升高。取食含有BtCry1Ac毒蛋白飼料的幼蟲體內(nèi)，中腸蛋白酶活性沒有升高。小地老虎和棉鈴蟲幼蟲取食含有BtCry2Ab毒蛋白飼料后，小地老虎幼蟲體內(nèi)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活性升高，并且要高于棉鈴蟲幼蟲體內(nèi)酶活性。 ⑷在處理時間相同的條件下，小地老虎中腸消化液蛋白酶活性比棉鈴蟲中腸消化液高

4、；在37℃條件下，棉鈴蟲中腸消化液將130kD的BtCry1Ac原毒素酶解為60kD的毒素，并且穩(wěn)定時間較長。而小地老虎中腸消化液對BtCry1Ac原毒素酶解作用，除得到60kD的毒素外，在超過一定時間的條件下，還得到了40kD和分子量更小的蛋白。 ⑸采用PCR技術，從小地老虎中克隆了小地老虎類Cadherin受體基因。Cadherin類受體基因測序的堿基序列長1136bp，與GenBank中公布的家蠶、玉米螟、舞毒蛾、棉鈴蟲、