電針足三里或中脘穴對急性胃黏膜損傷大鼠胃感覺和運動的調(diào)控.pdf

1、針灸穴位對內(nèi)臟具有調(diào)節(jié)作用，其作用機制一直是針灸基礎研究中的重點。針刺穴位對內(nèi)臟功能的調(diào)節(jié)屬于“軀體-內(nèi)臟”反射的范疇。在針刺對胃運動的調(diào)節(jié)中存在穴位特異性，以往的研究表明這與神經(jīng)節(jié)段性支配和自主神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)相關，但其在中樞的調(diào)節(jié)機制尚不明確。刺激不同穴位產(chǎn)生特異性的靶器官效應，這其中必有其相應的神經(jīng)生物學調(diào)節(jié)機制。闡明這些調(diào)節(jié)機制，將對針灸臨床選穴奠定科學基礎。
　　軀體與內(nèi)臟聯(lián)系的外周機制是軸突反射。在以往的研究中，對穴位與

2、內(nèi)臟的聯(lián)系較為常見的解釋是神經(jīng)節(jié)段學說。該學說很好的解釋了近節(jié)段的俞募穴與對應內(nèi)臟疾病之間產(chǎn)生療效的神經(jīng)生物學基礎，但對于遠節(jié)段的下肢穴位（如足三里穴），其治療作用與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能完整性有關。內(nèi)臟感覺和穴位的傳入信息到達延髓后進行整合，通過自主神經(jīng)的下行傳導通路對內(nèi)臟活動進行調(diào)節(jié)。目前的研究認為孤束核（nucleus of solitary tract，NTS）和迷走神經(jīng)背核(dorsalmotor nucleus of vagus

3、，DMV)是接受內(nèi)臟感覺投射和調(diào)節(jié)胃運動的最基本的核團。
　　足三里是足陽明胃經(jīng)要穴;中脘是胃的募穴、八會穴的腑會、足陽明胃經(jīng)與任脈交會穴。這兩個穴位作為治療胃臟疾病的穴位，應用非常廣泛。以往的研究表明針刺足三里通過激活迷走神經(jīng)引起胃運動的增強，而針刺中脘則通過同節(jié)段的交感神經(jīng)的作用引起胃運動的抑制。足三里和中脘穴對胃運動的不同調(diào)節(jié)效應在延髓可能與NTS和DMV中的胃內(nèi)臟感覺及運動相關的神經(jīng)元密切相關。神經(jīng)元被刺激激活的一種標志是

4、c-fos表達，可用其分析中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元受到外周刺激后的活動變化。本研究采用稀鹽酸(HCl)造成胃黏膜損傷模型，從形態(tài)學、電生理學的角度觀察電針刺激足三里穴或中脘穴對胃黏膜損傷大鼠延髓c-fos的表達、胃電活動的變化以及其對NTS與DMV神經(jīng)元放電的影響，揭示電針對胃內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運動影響的中樞機制，為針刺作用機制提供科學依據(jù)。
　　1、實驗目的
　　1、胃黏膜損傷對大鼠胸髓背角和延髓NTS神經(jīng)元c-fos表達的影響及

5、針刺對其的作用。采用免疫組織化學的研究方法，明確胃黏膜損傷所產(chǎn)生的原癌基因c-fos在胸髓背角和延髓NTS中的表達，為下一步電生理學研究明確胞外放電的記錄位置。在此基礎上觀察電針刺激不同穴位對這些部位的神經(jīng)元c-fos表達的影響。
　　2、觀察電針足三里、中脘穴對胃黏膜損傷大鼠胃電（electrogastrogram，EGG）活動、延髓NTS和DMV神經(jīng)元的胞外放電的影響。采用多通道陣列電極技術，記錄大鼠延髓NTS和DMV神經(jīng)元的

6、胞外放電并同步觀察胃黏膜損傷刺激信息、胃運動以及電針刺激不同穴位在延髓內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運動中樞的加工和整合，明確電針足三里和中脘穴對胃內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運動影響的中樞機制。
　　2、動物及實驗方法
　　選用正常成年無特定病原菌（SPF，specific pathogen free）級Sprague-Dawle大鼠66只，雄性，200-250g，由中國醫(yī)學科學院提供。實驗前禁食24小時以排空胃內(nèi)食物，并飼以5％葡萄糖水。用于形態(tài)學實

7、驗的動物為16只，實驗動物隨機分為4組:生理鹽水對照組（按1ml/100g體重劑量，經(jīng)胃導管導入生理鹽水）、胃黏膜損傷模型組（按1ml/100g體重劑量，經(jīng)胃導管導入0.5mol/L的HCl）、胃黏膜損傷模型+電針足三里組、胃黏膜損傷模型+電針中脘組。生理鹽水對照組和胃黏膜損傷模型組在完成灌胃后45min進行灌流固定;胃黏膜損傷模型+電針組采用頻率為15Hz，刺激強度2mA的電針刺激，在HCl灌胃10min后電針干預30min，于灌胃后

8、45min進行灌流固定。取脊髓胸段(T8-12)和延髓段，樣本經(jīng)后固定脫水處理后，進行冰凍切片，使用免疫熒光染色的方法觀察c-fos陽性神經(jīng)元在胸髓背角和延髓NTS核團中的表達。用于電生理學實驗的動物為50只，隨機分為5組:電針足三里組、電針中脘組、胃黏膜損傷模型組（按1ml/100g體重劑量，經(jīng)胃導管導入0.5mol/L的HCl）、胃黏膜損傷模型+電針足三里組、胃黏膜損傷模型+電針中脘組。通過手術在大鼠胃漿膜層放置胃電記錄電極，選擇在

9、延髓c-fos表達密集的NTS區(qū)域放置多通道陣列電極，同步記錄胃電和延髓不同核團神經(jīng)元胞外放電，通過觀察正常生理狀態(tài)下電針前后胃電指標:胃平滑肌細胞放電(gastric myoelectrical activity，GMA)的頻率（簇/分，cluster per minute）和胃電慢波(gastric slow wave，GSW)的積分(mV·sec)的改變，胃黏膜損傷前后胃電和神經(jīng)元放電頻率的改變以及胃黏膜損傷后電針足三里或中脘穴干

10、預前后胃電和神經(jīng)元放電頻率的改變，觀察分析電針足三里或中脘穴在胃黏膜損傷模型中對胃內(nèi)臟感覺和內(nèi)臟運動核團的作用機制。
　　3、結果
　　3.1急性胃黏膜損傷大鼠胸髓背角和延髓NTS神經(jīng)元c-fos表達的影響及電針足三里、中脘的作用
　　3.1.1急性胃黏膜損傷對大鼠脊髓背角神經(jīng)元c-fos表達的影響
　　胃黏膜損傷模型組在T10節(jié)段脊髓背角中c-fos免疫陽性反應神經(jīng)元主要分布在Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ板層，可以看到呈深染的細

11、胞核，胞漿也有染色。急性胃黏膜損傷對大鼠胸髓節(jié)段背角神經(jīng)元的c-fos表達沒有顯著影響(P＞0.05，n=4)。
　　3.1.2急性胃黏膜損傷對延髓NTS區(qū)神經(jīng)元c-fos表達的影響及電針足三里、中脘的作用
　　急性胃黏膜損傷后，c-fos免疫陽性反應神經(jīng)元NTS聯(lián)合核和內(nèi)側亞核出現(xiàn)，其中在聯(lián)合核和內(nèi)側亞核尾端密集表達，在聯(lián)合核和內(nèi)側亞核頭端少量表達。而急性胃黏膜損傷導致延髓NTS中內(nèi)側亞核尾端c-fos免疫陽性反應的神經(jīng)元

12、較生理鹽水組相比明顯增多(P＜0.01，n=4)。電針足三里、中脘穴均可減少延髓NTS區(qū)急性胃黏膜損傷所產(chǎn)生c-fos表達，電針足三里穴的所產(chǎn)生的效應明顯優(yōu)于電針中脘穴(P＜0.05，n=4)。
　　3.2電針足三里、中脘穴對大鼠胃電的影響
　　電針足三里穴后，正常大鼠GMA頻率明顯增加(P＜0.05，n=7)，GSW積分明顯增加(P＜0.05，n=9)。說明電針足三里穴可以顯著增強胃運動。
　　電針中脘穴后，正常大鼠

13、GMA頻率為明顯減少(P＜0.05，n=7)，GSW積分明顯減少(P＜0.05，n=10)。說明電針中脘穴對胃運動有明顯的抑制效應。
　　3.3急性胃黏膜損傷對大鼠胃電、NTS和DMV神經(jīng)元放電的影響及電針足三里、中脘的作用
　　3.3.1急性胃黏膜損傷對大鼠胃電的影響及電針足三里、中脘的作用
　　在急性胃黏膜損傷90s后大鼠GMA頻率較損傷明顯增多(P＜0.01，n=7);其GSW積分明顯增大(P＜0.01，n=7)

14、。急性胃黏膜損傷5min后大鼠GMA頻率明顯減少(P＜0.01，n=7);GSW積分顯著增大(P＜0.05，n=7)。急性胃黏膜損傷30min后大鼠GMA頻率明顯減少(P＞0.05，n=7); GSW積分相比無顯著差異。說明急性胃黏膜損傷可以導致胃運動的顯著增強且持續(xù)約30min。
　　急性胃黏膜損傷可以引起胃運動的增強，而電針可以抑制這種傷害性增強。在損傷10min后，電針足三里后GSW積分較電針前明顯減少(P＜0.05，n=1

15、0)而在損傷10min后，電針中脘穴后GSW積分較電針前也明顯減少(P＜0.05，n=10)。說明電針足三里或中脘對急性胃黏膜損傷導致的胃運動的增強有抑制作用，且兩個穴位的抑制作用無差異。
　　3.3.2急性胃黏膜損傷對大鼠NTS神經(jīng)元放電的影響及電針足三里、中脘的作用
　　實驗共記錄到NTS中對急性胃黏膜損傷有反應的神經(jīng)元細胞（前后放電頻率變化率超過30％的細胞）61個，其中興奮性神經(jīng)元54個（占88.5％），對抑制性神經(jīng)

16、元7個（占11.5％）。NTS中存在對胃黏膜損傷興奮的神經(jīng)元，在胃黏膜損傷1 min后和5min后其放電頻率均顯著增多(P＜0.01，n=54);急性胃黏膜損傷47min后其放電頻率與損傷前相比無差異(P＞0.05，n=54)。說明急性胃黏膜損傷可以導致NTS神經(jīng)元放電的改變，而且這種傷害性刺激持續(xù)一段時間后恢復。
　　電針足三里或中脘穴均可抑制急性胃黏膜損傷大鼠NTS中興奮性神經(jīng)元放電活動。急性胃黏膜損傷10min后，電針足三里

17、穴，NTS興奮性神經(jīng)元放電頻率與電針前相比明顯減少(P＜0.05，n=46);電針中脘穴，NTS興奮性神經(jīng)元放電頻率與電針前相比明顯減少，(P＜0.05，n=33)。電針足三里對NTS興奮性神經(jīng)元放電的抑制率為67.64±4.11％，電針中脘對NTS興奮性神經(jīng)元放電的抑制率為48.47±3.43％，說明足三里的抑制作用顯著優(yōu)于中脘（P＜0.05）。
　　3.3.3急性胃黏膜損傷對大鼠DMV神經(jīng)元自發(fā)放電的影響及電針足三里、中脘的作

18、用
　　實驗共記錄到DMV中對急性胃黏膜損傷的反應即損傷前后放電頻率變化率均不超過30％，因此不能其改變沒有生理學意義。
　　4、結論
　　1.0.5mol/L的鹽酸造成胃黏膜損傷導致延髓NTS的聯(lián)合核和內(nèi)側亞核c-fos陽性神經(jīng)元表達顯著增加，電針足三里穴可以抑制NTS神經(jīng)元中c-fos蛋白的表達，且抑制作用明顯優(yōu)于電針中脘穴。
　　2.急性胃黏膜損傷的傷害性刺激所產(chǎn)生反應的持續(xù)時間大約為30min，在此期間胃