應用組織芯片檢測宮頸癌中Survivin mRNA及其蛋白與P63蛋白的表達和臨床意義.pdf

1、目的：宮頸癌(cervical carcinoma)是女性生殖道惡性腫瘤中最常見者之一，其發(fā)生過程要經(jīng)歷一個較長的癌前病變，即宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)過程。目前已知腫瘤的發(fā)生不僅與腫瘤細胞的增殖和分化異常有關，而且與細胞凋亡基因的變化有關。增殖和凋亡之間的失衡可導致腫瘤的發(fā)生。本實驗通過對正常宮頸、CIN及宮頸鱗狀細胞癌組織中存活素(Survivin)、P63蛋白表達

2、的檢測，探討Survivin、P63的表達在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用；Survivin、P63的表達與宮頸癌浸潤和轉(zhuǎn)移的關系；觀察P63在宮頸不同病變中表達分布的差異，闡述其在宮頸上皮分化過程中的作用；Survin與P63的表達在宮頸癌組織中的相關性，為進一步揭示宮頸癌的發(fā)病機制提供理論依據(jù)。 方法： 1.應用免疫組織化學法(Immunohistochemistry,IHC)檢測54例宮頸癌組織、153例CIN組織及

3、39例正常宮頸組織中Survivin蛋白、P63蛋白的表達。 2.應用原位雜交技術(In Situ Hlybridization，ISH)檢測54例宮頸癌組織、153例CIN組織及39例正常宮頸組織中Survivin mRNA的表達。 3.應用自制組織芯片技術將247例供體標本，按陣列設計順序依次放入受體蠟塊中，融合、切片、撈片、烤片制成需要的組織芯片。結(jié)果： 1.組織芯片制備結(jié)果按課題需要制作6×5組織芯片6張

4、，5×7組織芯片2張，組織點陣排列整齊，無點陣移位現(xiàn)象，無意義位點51個。故標本實際例數(shù)為宮頸癌48例，正常宮頸35例，CIN113例。組織位點的形態(tài)可觀測率為89.36％。 HE染色均勻，無脫片、異位和皺折。原位雜交染色及免疫組化染色，陽性定位清楚，背景干凈。 2.Survivin在宮頸不同病變中的表達采用ISH和IHC法分別檢測Survivin mRNA和蛋白在48例宮頸癌組織、35例正常宮頸組織及113例CIN組織

5、中的表達，檢測結(jié)果顯示：無論是蛋白水平還是mRNA水平，癌組織中Survivin的表達(ISH：64.58％，IHC：87.50％)均高于正常宮頸組織(ISH：14.29％，IHC：31.43％)(P＜0.05)；Survivin蛋白在宮頸癌組織中的表達與CIN Ⅰ(70.37％)、CIN Ⅱ(77.14％)、CINⅢ(80.39％)中的表達無明顯差異(P＞0.05)。Survivin mRNA在宮頸癌組織中的表達與在CIN Ⅱ(48.

6、57％)、CINⅢ(60.78％)中的表達無明顯差異(P＞0.05)，但與CIN Ⅰ(29.63％)中的表達差異顯著(P＜0.05)。 綜合IHC和ISH的結(jié)果，Survivin與患者年齡、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫物直徑及臨床分期無關(P＞0.05)。 宮頸癌組織中Survivin蛋白的表達與Survivin mRNA的表達呈正相關(rs=0.529，P＜0.05)。 3.P63蛋白在宮頸不同病變中的表達采用IH

7、C法檢測48例宮頸癌組織、35例正常宮頸組織及113例CIN組織中P63蛋白的表達發(fā)現(xiàn)，P63在宮頸癌組織中的強陽性率為25.00％，明顯高于正常宮頸組織、CIN Ⅰ及CINⅡ中的強陽性率，三者強陽性率分別為O％，3.70％，8.57％(P＜0.05)；但與CINⅢ的強陽性率(17.65％)無明顯差異(P＞0.05)；從CINⅠ→Ⅱ→Ⅲ，P63的表達具有顯著性差異(P＜0.05)。 P63的表達與患者年齡、腫物直徑、臨床分期及淋

8、巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(P＞0.05)，與腫瘤分化程度相關(P＜0.05)。 4 P63蛋白與Survivin蛋白的關系在宮頸癌組織中P63蛋白的表達與Survivin蛋白的表達呈顯著正相關(rs=0.364，P＜0.05)。 5 P63蛋白與Survivin mRNA的關系在宮頸癌組織中P63蛋白的表達與Survivin mRNA的表達無明顯相關性(rs=-0.016，P＞0.05)。 結(jié)論： 1.Survivi

9、n mRNA和蛋白在宮頸癌組織中的表達明顯高于正常宮頸組織，因而提示Survivin可能與宮頸癌的發(fā)生有關。Survivin mRNA在宮頸癌與CINⅠ的表達差異顯著，提示Survivin mRNA對宮頸早期病變的檢測是有用的。Survivin mRNA及蛋白的表達與年齡、腫物分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫物直徑及臨床分期無相關性。 2.Survivin蛋白在正常宮頸與CIN各級病變中的表達差異具有顯著性，說明Survivin可以作為

10、宮頸癌前病變檢測指標；Survivin蛋白在宮頸癌與CIN各級病變之間的差異不顯著，說明Survivin蛋白可能參與宮頸的不同病變過程。Survivin蛋白在CIN不同病變中的表達無差異，但卻存在明顯的分層變化，其分布規(guī)律與CIN的變化一致，這提示Survivin能為CIN病變提供一個較直觀的依據(jù)。 3 宮頸癌組織中Survivin蛋白的表達與Survivin mRNA的表達關系密切，揭示Survivin蛋白的表達水平可以間接反映其mR

11、NA的表達水平，而且Survivin的高表達可能與Survivin基因轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)有關。 4 P63蛋白在宮頸癌組織中的表達明顯高于正常宮頸組織，因而提示P63可能與宮頸癌的發(fā)生有關；從CIN I→II→III，P63的表達具有顯著性差異，說明P63與鱗狀上皮的分化程度呈反比，也提示P63對CIN的分期是有用的；P63在不同腫瘤分化的宮頸癌組織中的表達具有明顯差異，提示P63與宮頸上皮分化的程度密切相關；P63蛋白的表達與年齡

12、、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫物直徑及臨床分期無相關性。 5 宮頸癌組織中Survivin蛋白的表達與P63蛋白的表達關系密切，且隨著Survivin蛋白表達強度的增強，P63也隨之增強，提示兩者在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能具有協(xié)同作用。但P63與Survivin mRNA的表達無相關性，說明P63與Survivin之間的協(xié)同作用是發(fā)生在蛋白水平上的。 6 組織芯片手工制做，程序簡單、經(jīng)濟方便，是一種簡便可行，高效穩(wěn)定的技術方法，能