黑龍江茴魚（Thymallus arcticus grubei Dybowski）人工繁殖及胚胎發(fā)育觀察.pdf

1、黑龍江茴魚是一種典型的山澗溪流棲居的冷水性魚類。其肉質(zhì)鮮美，為名貴的食用魚類。由于捕撈強(qiáng)度過大及自然生存條件的改變，使黑龍江茴魚成為易危魚類。為了充分開發(fā)利用這一名貴的土著魚類，為人工養(yǎng)殖的發(fā)展提供大量苗種，同時(shí)也為更有效地保護(hù)黑龍江茴魚的自然資源，本研究采用組織學(xué)、繁殖生物學(xué)及胚胎學(xué)等方法對黑龍江茴魚的性腺結(jié)構(gòu)及配子發(fā)生、精子活力、胚胎及胚后發(fā)育進(jìn)行了研究，以期找到最適的方法對黑龍江茴魚進(jìn)行人工繁殖。 ⑴采用波恩氏液固定、常規(guī)

2、石蠟切片的方法觀察黑龍江茴魚的精巢和卵巢結(jié)構(gòu)及發(fā)育情況。結(jié)果表明，黑龍江茴魚的精巢為小葉型，10月齡左右發(fā)育到Ⅱ期，此時(shí)精巢呈細(xì)帶狀，半透明，精巢中以精原細(xì)胞為主；3齡精巢達(dá)到Ⅴ期，性腺呈乳白色，橫斷面為橢圓形或圓形，表面血管增多，主要由精子組成，精小囊破裂，精子充滿小葉腔，擠壓腹部時(shí)，白色的精液會流出；黑龍江茴魚卵巢為封閉型，10月齡左右發(fā)育到Ⅱ期，性腺不透明，扁帶狀，略帶淡黃色，以Ⅱ時(shí)相的卵母細(xì)胞為主，少量卵母細(xì)胞開始向Ⅲ時(shí)相過渡;

3、2齡卵巢發(fā)育到Ⅲ期，雌雄易鑒別，卵巢擴(kuò)大，布滿粗大的血管，淺黃色，卵粒開始沉積卵黃。卵巢中Ⅲ時(shí)相的卵母細(xì)胞較多，也有部分Ⅱ時(shí)相卵母細(xì)胞。 ⑵用BSS和水兩種激活劑對黑龍江茴魚精子活力進(jìn)行測定，并在4℃和14℃(室溫)條件下，對精原液和用ASP稀釋的精液分別進(jìn)行保存試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，用BSS和水均可激活黑龍江茴魚精子，其精子活率分別可達(dá)100％和98％。14℃條件下,用BSS激活黑龍江茴魚精子平均壽命為72.1s，A級(快速)運(yùn)

4、動時(shí)間平均為14.1s：用水激活精子平均壽命為67.2s，A級運(yùn)動時(shí)間平均為12.5s。不同溫度保存的精子壽命和快速運(yùn)動時(shí)間也有顯著差異：精原液4℃保存2h后精子失去A級運(yùn)動，其激活率在70％以上，保存6h后激活率小于20％：精原液14℃保存1.5h后精子失去A級運(yùn)動。其激活率大于70％，4h后激活率小于20％。經(jīng)ASP(pH分別為7.0、7.8、8.0、8.5、9.0)稀釋的精液，在4℃和14℃條件下，BSS和water對精子的激活率

5、均小于20％，且精子均呈現(xiàn)C、D級運(yùn)動，1.5h后各保存組激活率為0。試驗(yàn)結(jié)果表明，BSS對黑龍江茴魚的精子有良好的激活效果：精原液4℃保存效果好于14℃，在4℃保存條件下2h以內(nèi)使用，可以得到理想的結(jié)果：精液不宜用ASP稀釋保存。 ⑶采用不同的方法進(jìn)行黑龍江茴魚的人工繁殖。試驗(yàn)用親魚60組，性比為1:1.47。使用DOM+LRH-A2、HcG和S-GnRH-A進(jìn)行人工催產(chǎn)，胸鰭基部一次注射。擠腹法采卵、采精，分別采用干法和濕法

6、授精，用泉水和井水兩種水源孵化。試驗(yàn)結(jié)果顯示，親魚的成熟良好，催產(chǎn)效果較為理想，催產(chǎn)率為95％；雌魚平均產(chǎn)卵量為1948(884～3504)粒/尾，平均懷卵量為2435(1024～3721)粒/尾；孵化期平均水溫7.5(6.5～10.2)℃，積溫達(dá)到90～95℃·d眼點(diǎn)出現(xiàn)，100～110'C·d眼點(diǎn)明顯：120～130℃·d時(shí)開始破膜，190～200℃·d破膜結(jié)束；240℃·d開始上浮;260℃·d左右開口。結(jié)果表明，濕法授精效果顯著

7、好于干法授精，濕法平均發(fā)眼率為63.89％，平均破膜率為78.26％，平均上浮率為78.14％：泉水孵化效果顯著好于井水孵化，平均發(fā)眼率為65.49％、平均破膜率為80.13％、平均上浮率為78.23％。 ⑷采用波恩試液固定、剝離卵膜的方法對黑龍江茴魚的胚胎發(fā)育及孵化仔魚卵黃囊吸收情況進(jìn)行觀察，同時(shí)對70日齡內(nèi)的仔、稚魚進(jìn)行全長、體重測量，以觀察其生長狀況。結(jié)果表明，黑龍江茴魚卵是典型的端黃卵，其卵裂方式為盤狀卵裂，受精后原生質(zhì)

8、集中于動物極，而卵黃則占據(jù)了卵的大部分。胚胎發(fā)育可分為23個(gè)期，包括受精卵(原生質(zhì)聚集和胚盤隆起)、2細(xì)胞期、4細(xì)胞期、8細(xì)胞期、16細(xì)胞期、32細(xì)胞期、64細(xì)胞期、多細(xì)胞期、囊胚早期、囊胚中期、低囊胚期、囊胚晚期、原腸早期、原腸中期、原腸晚期、神經(jīng)胚期、胚孔封閉期、眼囊出現(xiàn)期、胸鰭原基期、晶體出現(xiàn)期、眼球色素沉積期、循環(huán)期和出膜期；孵化仔魚的卵黃囊體積隨著日齡的增加而逐漸減小，4日齡前吸收相對較快，之后吸收相對較慢，積溫達(dá)到384.3