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1、目的研究在瘢痕形成過程中Wnt信號(hào)通路的活性調(diào)節(jié)機(jī)制,以探討瘢痕形成的調(diào)控機(jī)制。
方法1、切取患者的瘢痕組織與鄰近正常組織,利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)β-catenin在其中的分布情況。其中三例為椎板切除術(shù)后硬膜外瘢痕,另外兩例為皮膚瘢痕。我們所取的瘢痕組織均為超過八周,已停止生長(zhǎng)的成熟瘢痕組織。
2、從切取的患者的瘢痕組織和鄰近正常組織中分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,利用免疫熒光標(biāo)記方法檢測(cè)體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中β-caten
2、in的分布情況。
3、對(duì)體外培養(yǎng)的瘢痕組織成纖維細(xì)胞中的β-catenin和反式高爾基體的標(biāo)記蛋白Syntaxin6進(jìn)行免疫熒光雙標(biāo)記,利用激光共聚焦顯微成像系統(tǒng)攝取圖像進(jìn)行分析,對(duì)β-catenin是否在高爾基體聚集進(jìn)行研究。
結(jié)果1、瘢痕組織成纖維細(xì)胞中β-catenin的分布與正常組織成纖維細(xì)胞不同,后者β-catenin在胞漿中呈彌散分布,而前者胞漿中的β-catenin呈團(tuán)塊樣聚集在臨近細(xì)胞核的位置。
3、> 2、體外培養(yǎng)的瘢痕組織和鄰近正常組織的成纖維細(xì)胞中的β-catenin的分布情況不同,體外培養(yǎng)的瘢痕組織中的β-catenin在核周聚集,而在相鄰正常組織來源的成纖維細(xì)胞中的β-catenin則在胞漿中呈彌散分布。
3、對(duì)利用激光共聚焦顯微成像系統(tǒng)攝取的相關(guān)圖像進(jìn)行重疊分析,發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的瘢痕組織成纖維細(xì)胞中的β-catenin與Syntaxin6的標(biāo)記位置相互重疊;同時(shí)分析Syntaxin6和β-catenin熒光信號(hào)
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