缺血預(yù)處理及UW液聯(lián)合丹參酮ⅡA灌洗對(duì)缺血組織保護(hù)性研究.pdf

1、第一部分缺血預(yù)處理對(duì)大鼠橫行腹直肌皮瓣的保護(hù)及其影響因素的研究。 1.1目的： 應(yīng)用大鼠TRAM皮瓣模型，探討缺血時(shí)間、間隔再灌注時(shí)間及預(yù)處理次數(shù)對(duì)IPC的效應(yīng)的影響，為尋找合理而有效的IPC方案提供依據(jù)，從而使缺血預(yù)處理對(duì)皮瓣組織的保護(hù)更為有效。 1.2材料與方法： 選用wistar大鼠62只，建立TRAM皮瓣模型。 本研究分為兩個(gè)階段：第一階段：建模后隨機(jī)分為對(duì)照組和4個(gè)預(yù)處理組(IPC)，每

2、組10只，探討缺血時(shí)間、間斷再灌注時(shí)間對(duì)IPC的保護(hù)效應(yīng)的影響。對(duì)照組皮瓣單純放置30 min后，應(yīng)用微血管夾阻斷腹壁下血管誘導(dǎo)皮瓣缺血4 h，然后恢復(fù)皮瓣正常血供；IPC組皮瓣在誘導(dǎo)缺血前均經(jīng)過(guò)IPC處理，根據(jù)IPC方案的不同分為4組：即以微血管夾阻斷腹壁下血管5 min，再恢復(fù)血供5 min，處理2次，稱為IPC<,5/5>組，依此類推得到IPC<,5/10>組(缺血5 min/再灌注10 min，處理2次)、IPC<,10/10>

3、組(缺血10 min/再灌注10 min，處理2次)、IPC <,10/5>組(缺血10 min/再灌注5 min，處理2次)，其他處理與對(duì)照組相同。皮瓣恢復(fù)血供4 h后采集標(biāo)本(每組取4只)，通過(guò)測(cè)定血清中CPK、骨骼肌組織含水量和MDA含量，以及HE染色觀察骨骼肌組織結(jié)構(gòu)；術(shù)后第7 d，計(jì)算皮瓣存活面積百分比(每組剩余6只)，評(píng)估皮瓣組織的I/R損傷程度及其存活情況。第二階段：在第一階段結(jié)果基礎(chǔ)上，選擇第一階段中IPC保護(hù)效果最佳的

4、IPC方案，再附加兩個(gè)預(yù)處理組：即預(yù)處理1次組、預(yù)處理3次組，每組6只，進(jìn)一步觀察預(yù)處理次數(shù)(1～3次)對(duì)IPC的保護(hù)效應(yīng)的影響。術(shù)后第7 d，計(jì)算皮瓣存活面積百分比，評(píng)估皮瓣存活情況。 1.3結(jié)果： 第一階段研究中，所有預(yù)處理組中血清CPK含量及腹直肌含水量、MDA的含量較對(duì)照組均有顯著下降(P<0.01)，并有效抑制腹直肌纖維的水腫程度及白細(xì)胞的浸潤(rùn)，特別是IPC<,10/5>組中各項(xiàng)指標(biāo)降低幅度更為顯著，并與其他預(yù)

5、處理組比較存在顯著性差異(P<0.05)。對(duì)照組皮瓣平均存活面積為23.6±3.1﹪；各預(yù)處理組皮瓣平均存活面積與對(duì)照組比較提高2.5～3倍(P<0.01)，尤其是在IPC<,10，5>組中皮瓣平均存活面積提高的更為顯著，并與其他預(yù)處理組比較也存在顯著性差異(P<0.05)。 第二階段研究選擇IPC<,10/5>方案作為研究對(duì)象，結(jié)果表明2次IPC<,10/5>和3次IPC<,10/5>改善皮瓣存活的效果較1次IPC<,10/5

6、>更為顯著(P<0.05)，而2次IPC<,10/5>與3次IPC <,10/5>間比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 1.4結(jié)論： 1、IPC可提高大鼠TRAM皮瓣對(duì)缺血的耐受，并減輕TRAM皮瓣組織的I/R損傷。 2、與其他預(yù)處理組比較，IPC<,10/5>(缺血10 min，再灌注5 min)組中各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的改善最為明顯，表明缺血10 min、間斷再灌注5 min方案對(duì)誘導(dǎo)大鼠TRAM皮瓣的IPC保護(hù)效應(yīng)

7、更為有效，這些結(jié)果顯示缺血時(shí)間/間斷再灌注時(shí)間可能是影響IPC保護(hù)效應(yīng)的關(guān)鍵性因素；預(yù)處理次數(shù)不同組間比較，發(fā)現(xiàn)2次IPC<,10/5>組及3次。IPC<,10/5>組中TRAM皮瓣的平均存活面積明顯高于1次IPC<,10/5>組，這提示在一定程度上，IPC的保護(hù)效應(yīng)可能產(chǎn)生部分疊加，提示預(yù)處理次數(shù)也是影響1PC的保護(hù)效應(yīng)的重要因素。總之，IPC可減輕TRAM皮瓣組織的I/R損傷，其保護(hù)效應(yīng)受缺血時(shí)間/間斷再灌注時(shí)間及預(yù)處理次數(shù)的影響，

8、本研究結(jié)果顯示IPC<,10/5>方案(缺血10 min，間斷再灌注5 min)對(duì)皮瓣保護(hù)更為有效，并以預(yù)處理2～3次為宜。 第二部分 UW液聯(lián)合丹參酮ⅡA灌洗對(duì)缺血肢體的保護(hù)。 2.1目的： 應(yīng)用大鼠缺血肢體模型，觀察UW液及UW液+丹參酮Ⅱ A灌洗對(duì)缺血肢體I/R損傷的影響，并探討所添加丹參酮ⅡA的劑量與其保護(hù)效應(yīng)的關(guān)系，從而評(píng)估UW液聯(lián)合丹參酮Ⅱ A灌洗在減輕缺血肢體I/R損傷中的應(yīng)用價(jià)值。 2.2

9、材料與方法： 選用SD大鼠40只，隨機(jī)分為5組，每組8只。缺血再灌注(I/R)組中動(dòng)物通過(guò)阻斷股動(dòng)脈造成肢體缺血4h，然后恢復(fù)其血供；4個(gè)灌洗組于肢體缺血3.5h后，應(yīng)用不同灌洗液經(jīng)腹壁淺動(dòng)脈進(jìn)行灌洗30min，根據(jù)灌洗液分為UW組、UW+T<,0.05>組(0.05mg/mL)、UW+T<,0.1>組(0.1mg/mL)和Uw+TM<,0.2>組(0.2mg/mL)，肢體內(nèi)殘存血液及灌洗液自腹壁淺靜脈流出；所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物恢復(fù)血供

10、后均持續(xù)灌注6h；于不同時(shí)間點(diǎn)，采集血清及骨骼肌標(biāo)本進(jìn)行各項(xiàng)相關(guān)檢測(cè)。通過(guò)監(jiān)測(cè)骨骼肌再灌注血流量的變化，測(cè)定血清中CPK、 AST、LDH的含量及骨骼肌中MDA、SOD、ATP酶活性以及含水量，并檢測(cè)骨骼肌血管內(nèi)皮ICAM-1的表達(dá)、骨骼肌細(xì)胞的凋亡及骨骼肌超微結(jié)構(gòu)的變化，來(lái)綜合評(píng)估缺血肢體的I/R損傷程度。 2.3結(jié)果： 缺血肢體應(yīng)用UW液及UW液+丹參酮ⅡA液灌洗后，均可有效的抑制再灌注時(shí)骨骼肌過(guò)度灌注現(xiàn)象，并較好地

11、維持了骨骼肌的血流灌注量。恢復(fù)灌注2h時(shí)，UW組中血清中CPK、AST和LDH含量較I/R組降低20～30﹪(P<0.01)，而恢復(fù)灌注4 h和6 h時(shí)，與I/R組比較則無(wú)明顯差異(P>0.05)；恢復(fù)灌注2h、4h、6h時(shí)，UW液+丹參酮ⅡA灌洗組的血清中各細(xì)胞內(nèi)酶含量與I/R組比較均有顯著性差異(P<0.05～P<0.01)，特別是UW+T<,0.1>組及UW+T<,0.2>組細(xì)胞內(nèi)酶含量降低更為顯著(P<0.01，vs UW)。缺

12、血4h時(shí)，UW組中骨骼肌含水量及MDA含量較I/R組明顯降低，而SOD及ATP酶活性卻較FR組明顯升高(P<0.05～P<0.01)；恢復(fù)灌注6h時(shí)，UW組中各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與I/R組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。缺血及再灌注期，UW液+丹參酮ⅡA組中各項(xiàng)指標(biāo)均明顯優(yōu)于與I/R組(P<0.01)。 UW液和UW液+丹參酮Ⅱ A灌洗，均不同程度地抑制了骨骼肌血管內(nèi)皮ICAM-1的表達(dá)和細(xì)胞的凋亡(P<0.05～P<0.01)，較好

13、的維持了骨骼肌纖維的超微結(jié)構(gòu)；并以UW液聯(lián)合丹參酮ⅡA應(yīng)用更為有效，特別是UW+T<,0.1>組、UW+T<,0.2>組中保護(hù)效果最為顯著(P<0.01，vs UW)。 2.4結(jié)論： 1、應(yīng)用UW液及UW液+丹參酮ⅡA灌洗，均在不同程度上減輕缺血肢體I/R損傷，提示適當(dāng)?shù)膭?dòng)脈灌洗對(duì)缺血肢體組織具有保護(hù)作用。 2、UW液+丹參酮ⅡA灌洗較單獨(dú)UW液灌洗對(duì)缺血肢體的保護(hù)作用更為有效，表明UW液與丹參酮ⅡA聯(lián)合應(yīng)用可能