丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)腦缺血再灌注模型大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、腦血管疾病(Cerebrovascular Diseases,CVD)是神經(jīng)系統(tǒng)疾病中最為常見和多發(fā)的疾病,近年來已成為全球人口死亡和致殘的首要原因,嚴(yán)重威脅人類的健康和生命安全。其中,急性缺血性腦卒中(腦梗死)是最常見的腦卒中類型,約占全部腦卒中病例的60％～80%。即使在存活的腦卒中患者中,仍有大部分存在不同程度的神經(jīng)功能障礙,導(dǎo)致不同程度的殘疾,給家庭和社會(huì)帶來沉重的負(fù)擔(dān)。
　　丹參(SalviaMiltiorrhza)是雙

2、子葉植物唇形科,傳統(tǒng)中醫(yī)常用的活血化瘀藥物,在我國傳統(tǒng)醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用已有二千多年歷史。根據(jù)我國傳統(tǒng)中醫(yī)理論,丹參具有活血調(diào)經(jīng)、祛瘀止痛、涼血消癰、除煩安神等功效。20世紀(jì)30年代至今,研究者對(duì)丹參的有效成分及其藥理作用做了充分的研究。丹參酮ⅡA為丹參中分離的二萜醌類化合物,是丹參的主要有效成分。丹參酮ⅡA磺酸鈉(簡(jiǎn)稱DS-201)為脂溶性丹參酮ⅡA,經(jīng)磺化而得到的水溶性物質(zhì)。
　　丹參酮ⅡA作為中藥有效成分單體制劑,在我國面市已數(shù)十

3、年,廣泛用于治療心肺系統(tǒng)疾病、各類皮膚及淺表組織炎癥。研究證明,丹參酮ⅡA能有效改善冠狀動(dòng)脈側(cè)支循環(huán),減小梗死心肌面積,同時(shí)可解除微血管痙攣,增加微循環(huán)流速和流量,消除局部靜脈血液淤滯,改善組織細(xì)胞缺血缺氧所致的代謝障礙,在肺部疾病中可抑制肺組織纖維化,減少肺組織炎性細(xì)胞浸潤,增加肺毛細(xì)血管血流量。
　　近年通過大量研究,丹參酮ⅡA在腦血管疾病領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸受到關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)意在研究其對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
　　研

4、究目的：
　　本實(shí)驗(yàn)研究丹參酮ⅡA磺酸鈉對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷模型大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用,探討其部分機(jī)制。
　　研究方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組清潔級(jí)SD大鼠40只,體重202-305(247.57±32.09)g,按隨機(jī)數(shù)字表法分為四組,分別為假手術(shù)組(Shamoperated)、局灶性腦缺血模型組(簡(jiǎn)稱:模型組,Model)、丹參酮ⅡA磺酸鈉預(yù)處理組(簡(jiǎn)稱:預(yù)處理組,Pretreatment)、丹參酮ⅡA磺酸鈉治療組

5、(簡(jiǎn)稱:治療組,Treatment),每組10只大鼠。
　　2、動(dòng)物模型制備模型組、預(yù)處理組和治療組采用目前公認(rèn)的改良Longa法,放置線栓制作大腦中動(dòng)脈閉塞模型(Middlecerebralarteryocclusion,MCAO),2小時(shí)后拔出線栓,形成再灌注,獲得實(shí)驗(yàn)所需要的缺血再灌注損傷模型。假手術(shù)組僅做切皮、分離血管,不放置線栓。
　　3、給藥方法假手術(shù)組、模型組大鼠分別在MCAO造模手術(shù)前30分鐘,腹腔注射生理鹽

6、水2ml;預(yù)處理組和治療組大鼠給予腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉原液30mg/kg,預(yù)處理組大鼠在MCAO造模手術(shù)前30分鐘注射;治療組在MCAO造模手術(shù)后2小時(shí),開放血流時(shí)注射。
　　4、腦梗死體積百分比計(jì)算大鼠處死后,腦組織薄片,進(jìn)行TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)染色,數(shù)碼相機(jī)拍照染色標(biāo)本,使用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件(HPIAS—1000)計(jì)算梗死區(qū)腦組織比例。
　　5、腦含水量計(jì)算實(shí)驗(yàn)大鼠于再灌注后24h處死,取出完整大

7、腦,留梗死半球,電子精密天平測(cè)濕重,再將標(biāo)本置于100℃電熱恒溫干燥箱至恒重后測(cè)干重。計(jì)算腦含水量。
　　6、神經(jīng)功能評(píng)分應(yīng)用ZeaLonga神經(jīng)功能評(píng)分法,于再灌注后12小時(shí)、24小時(shí)分別進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分,評(píng)價(jià)大鼠神經(jīng)功能缺失狀況。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):無神經(jīng)功能損傷癥狀為0分;不能伸展對(duì)側(cè)前爪為1分;向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)為2分;向?qū)?cè)傾倒3分;無自主活動(dòng)伴意識(shí)障礙為4分;死亡為5分。得分越高,提示神經(jīng)功能損傷越嚴(yán)重。
　　7、TNF-α含量測(cè)

8、定采用雙夾心酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)各組大鼠血清中TNF-α進(jìn)行定量分析。
　　8、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(表示,多組比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、梗死體積:TTC染色后,假手術(shù)組未見明顯梗死灶,其余各組均有不同程度的白色梗死灶。經(jīng)測(cè)量梗死體積并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,各組差異有顯著意義,

9、F=7.29,P<0.01;進(jìn)一步配對(duì)比較,模型組高于預(yù)處理組和治療組,t=13.70、11.26,P<0.01。
　　2、腦含水量:各組腦含水量比較,差異有顯著意義,F=8.19,P<0.01;進(jìn)一步配對(duì)比較,模型組腦含水量高于預(yù)處理組和治療組,t=3.13、2.97,P<0.05。
　　3、神經(jīng)功能:除假手術(shù)組外,其余各組不同時(shí)間點(diǎn)均可見不同程度的神經(jīng)功能缺損。評(píng)分比較,差異有顯著意義,術(shù)后12小時(shí),F=4.72,P<0

10、.05;術(shù)后24小時(shí),F=9.72,P<0.01;配對(duì)比較,模型組不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)功能評(píng)分高于預(yù)處理組和治療組t=2.74、2.82、3.34、2.86,P<0.05。
　　4、血清TNF-α:各組血清TNF-α含量差異有顯著意義,F=3.96,P<0.05;配對(duì)比較,模型組高于預(yù)處理組和治療組t=2.78、2.12,P<0.05。
　　結(jié)論：
　　丹參酮ⅡA磺酸鈉可降低局灶性腦缺血再灌注模型大鼠的腦梗死體積百分比、腦含