貴州部分玉米雜交種及其親本指紋圖譜的構(gòu)建與相關(guān)分析.pdf

1、本研究利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)我國(guó)貴州目前生產(chǎn)上正在使用或已(待)審定即將推廣應(yīng)用的雜交玉米品種48份及其親本81份共計(jì)129份材料進(jìn)行研究，建立了一套簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確可靠的SSR分子標(biāo)記技術(shù)鑒定體系，構(gòu)建了貴州部分玉米自交系及雜交組合的指紋圖譜，探索了多重PCR技術(shù)體系。其主要研究結(jié)果如下： 1.從玉米基因組DNA提取、PCR反應(yīng)體系、PCR擴(kuò)增程序、聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染5個(gè)方面，進(jìn)行比較分析，建立了如下快速簡(jiǎn)便的玉米S

2、SR分子標(biāo)記技術(shù)操作規(guī)程：(1)宜以SDS法或CTAB法提取玉米DNA樣品。(2)SSR反應(yīng)體系宜為：1UTaq酶，1xbufer，60μg模板DNA，2.0mmol／LMg2+，0.15mmol／LdNTPs，0.3μmol／L引物。(3)擴(kuò)增程序宜為：預(yù)變性：93℃，1min;變性：93℃，1min；退火：60℃，2min；延伸：72℃，2min：2~4步驟：30個(gè)循環(huán)；延伸：72℃，5min。(4)宜用8％非變性聚丙烯酰胺凝膠或6

3、％變性聚丙烯酰胺凝膠分離SSR擴(kuò)增產(chǎn)物。(5)銀染法：蒸餾水洗2次；0.2％硝酸銀染色10min；蒸餾水洗2次；(3％氫氧化鈉+0.5％甲醛)溶液顯色。經(jīng)驗(yàn)證，用該技術(shù)規(guī)程進(jìn)行玉米SSR標(biāo)記分析能獲得經(jīng)濟(jì)有效的效果，利用SSR分子標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行玉米指紋圖譜的構(gòu)建是可行的。 2.根據(jù)北京市農(nóng)林科學(xué)院篩選出的100對(duì)玉米SSR核心引物，從每條染色體上選取2對(duì)，分別位于染色體的長(zhǎng)臂和短臂上，共20對(duì)核心引物，建立了玉米雜交種及其親本的D

4、NA指紋圖譜。根據(jù)分析，實(shí)際上只用10對(duì)引物就可以把129份供試玉米材料區(qū)分開。因此，本研究用20對(duì)SSR引物構(gòu)建的指紋庫(kù)，可以擴(kuò)展應(yīng)用范圍，即再增加一些材料，也可用該指紋庫(kù)進(jìn)行識(shí)別。 3.用于構(gòu)建貴州近些年審定的雜交種及其親本自交系指紋圖譜的20對(duì)SSR引物，多態(tài)性豐富，擴(kuò)增產(chǎn)物一般有4-7條帶，每條帶分子量在100-400bp范圍；平均每個(gè)位點(diǎn)鹼測(cè)到等位基因數(shù)為5.3個(gè)，多態(tài)信息量為0.611，標(biāo)記索引系數(shù)為3.34。利用這