紅海欖根部耐鹽相關(guān)蛋白的分離及質(zhì)譜鑒定研究.pdf

1、鹽脅迫影響植物生長、降低作物產(chǎn)量。耐鹽植物是通過多種生理代謝機(jī)制來達(dá)到耐鹽的目的，其中包括控制離子平衡、離子區(qū)隔化、釋放無害小分子維持滲透壓平衡以及通過氧化還原途徑清除鹽脅迫下產(chǎn)生的活性氧等。植物的耐鹽是一個復(fù)雜的數(shù)量性狀遺傳，涉及多基因調(diào)控和多種耐鹽機(jī)制的協(xié)調(diào)作用。近年來，植物耐鹽機(jī)理的研究取得巨大進(jìn)展，許多耐鹽關(guān)鍵基因陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)。 本研究從海南熱帶紅樹林資源中選取耐鹽植物紅海欖作為實(shí)驗(yàn)材料，通過高通量的蛋白組學(xué)方法的研究，分

2、離和鑒定紅海欖耐鹽相關(guān)蛋白和基因，為植物耐鹽機(jī)理研究提供蛋白組學(xué)上的證據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)通過雙向電泳技術(shù)分析淡栽處理和3％NaCl鹽栽處理后的紅海欖根部總蛋白，從中篩選差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，再經(jīng)過切膠回收、質(zhì)譜鑒定，然后根據(jù)質(zhì)譜鑒定結(jié)果進(jìn)行蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫檢索，尋找其同源蛋白，確定差異表達(dá)蛋白的氨基酸序列。 雙向電泳圖譜的結(jié)果表明，蛋白點(diǎn)主要集中在等電點(diǎn)4.0-8.5之間，分子量的分布范圍約在28KD-70KD。PDQuest8.0分

3、析軟件分析顯示，淡栽處理的紅海欖根部蛋白質(zhì)(R0)雙向電泳圖中共有981個蛋白點(diǎn)，鹽栽處理的紅海欖根部蛋白質(zhì)(R3)雙向電泳圖中有972個蛋白點(diǎn)，其中兩個處理的蛋白點(diǎn)匹配成對的數(shù)量為874。利用軟件定量分析檢測出的10倍差異以上的蛋白點(diǎn)，結(jié)合凝膠圖像直接觀察和比較，最終挑選出15個具有較大表達(dá)差異的蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。然后將質(zhì)譜鑒定結(jié)果在蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行檢索，共獲得10個陽性結(jié)果。這10個鹽脅迫下有差異表達(dá)的蛋白可被分為幾種類型：1)

4、疾病防御和抗逆性相關(guān)蛋白，如putativediseaseresistanceprotein(TMVN-like)，MutT/nudixprotein-like，Os01g0149500;2)氨基酸合成和基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)蛋白，如eukaryotictranslationinitiationfactor5A，elongationfactor1-alpha，retrotransposonprotein，putative：3)光合作用相關(guān)蛋白

5、，如phosphoenolpyruvatecarboxylase，isoform1；4)激素代謝或滲透調(diào)節(jié)相關(guān)酶類，如aci-reductonedioxygenase:5)能量代謝相關(guān)的蛋白，如Dynein-1-betaheavychain，flagellarinnerarmIlcomplex(l-betaDHC)；6)未知功能蛋白，如proteinCHLREDRAFT_194002，predictedprotein等。 上述這

6、些蛋白中MutT/nudixprotein-like和Os01g0149500可能是耐鹽相關(guān)蛋白，參與抗逆性反應(yīng)，使植物體免遭鹽脅迫侵害和適應(yīng)鹽脅迫環(huán)境；而retrotransposonprotein,.putative，Ty3-gypsysuclass可能是紅海欖在面對鹽脅迫時進(jìn)行表達(dá)調(diào)控的重要蛋白；aci-reductonedioxygenase則與甲硫氨酸環(huán)和膜脂抗氧化有關(guān)，鹽處理樣品的抗氧化過程可能導(dǎo)致其表達(dá)量下降；其它蛋白如e