解毒通絡(luò)方對(duì)EAE大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織基質(zhì)金屬蛋白酶-9的影響.pdf

1、目的：觀察中藥解毒通絡(luò)方對(duì)Wistar大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）急性期臨床癥狀、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理學(xué)改變、腦和脊髓組織中基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的影響，探究MS在發(fā)病急性期部分病理機(jī)制，為臨床治療多發(fā)性硬化（MS）急性期、挽救神經(jīng)功能損傷提供新的途徑。
　　方法：
　?。?）準(zhǔn)備健康雌性Wistar大鼠80只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為：空白組、模型組、激素組、中藥組，每組20只。空白組大鼠不造模，不用藥，每天給與生

2、理鹽水0.2ml灌胃；模型組EAE后開始每天給與生理鹽水0.2ml灌胃；激素組EAE后7天開始給予地塞米松藥液灌胃；中藥組EAE后7天開始給中藥液灌胃，以上灌胃方法均灌胃至實(shí)驗(yàn)終止。（2）EAE模型建立：采用豚鼠脊髓勻漿和完全福式佐劑（CFA）制成的混合液作為誘導(dǎo)各組模型大鼠抗原，屆時(shí)一并給予皮內(nèi)注射百日咳疫苗。每日觀察 EAE后各組動(dòng)物的臨床癥狀表現(xiàn)、行為學(xué)改變，測(cè)量體重變化情況，并給予神經(jīng)功能的評(píng)分。
　?。?）樣本采集：分別

3、于免疫后第14天和第21天，心臟灌流后取腦和脊髓組織置于4％多聚甲醛中固定，石蠟包埋、切片。
　?。?）蘇木素-伊紅（HE）法染色觀察腦、脊髓病理改變；免疫組化法測(cè)定組織內(nèi)MMP-9含量。
　　(5)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用SPSS19.0軟件包分析處理。
　　結(jié)果：
　?。?）大鼠發(fā)病率、神經(jīng)功能評(píng)：在第7d,空白組大鼠均無(wú)發(fā)病，模型組、激素組和中藥組間大鼠發(fā)病率及神經(jīng)功能評(píng)分比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。EAE各

4、組大鼠均出現(xiàn)體重輕度下降，相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　?。?）EAE后14d大鼠神經(jīng)功能評(píng)分：中藥組與激素組相比無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），中藥組、激素組分別與模型組相比均明顯降低，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（P＜0.01），中藥組與激素組比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；組織病理學(xué)切片炎性細(xì)胞數(shù)相比：中藥組和激素組相比無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；中藥組、激素組分別與模型組相比炎性細(xì)胞數(shù)均明顯減少，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯

5、（P＜0.01）；MMP-9的表達(dá)：中藥組、激素組與模型組相比均有顯著差異（P＜0.01），中藥組與激素組相比無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　（3）EAE后21d大鼠神經(jīng)功能評(píng)分：中藥組與激素組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），中藥組、激素組分別與模型組相比均明顯降低，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯（P＜0.01），組織病理學(xué)切片炎性細(xì)胞數(shù)相比：中藥組和激素組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；中藥組、激素組分別與模型組相比炎性細(xì)胞

6、數(shù)均明顯減少，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯（P<0.01）；MMP-9的表達(dá)：中藥組、激素組與模型組相比均無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）,激素組與中藥組比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）
　　結(jié)論：
　?。?）采用豚鼠脊髓勻漿添加完全弗氏佐劑并聯(lián)合滅活減毒百日咳桿菌誘導(dǎo) Wistar大鼠EAE模型穩(wěn)定可靠，發(fā)病率高。
　　（2）在14d急性期時(shí)模型組MMP-9表達(dá)較空白組明顯升高，激素組、中藥組MMP-9表達(dá)較模型組減少顯著，統(tǒng)