石竹中稀有內(nèi)生放線菌分類學(xué)鑒定及抗菌活性初步探究.pdf

1、植物內(nèi)生放線菌是定殖于植物組織中不會擾亂植物的生長發(fā)育的一類放線菌。雖然同樣是存活于植物體內(nèi)，但植物內(nèi)生放線菌卻并非病原菌。實驗表明，很多內(nèi)生菌有益于植物的生長繁殖。這是因為內(nèi)生旅線菌是一類產(chǎn)生多種活性次級代謝產(chǎn)物的原核微生物，這些次級代謝產(chǎn)物能夠抑制病原菌的繁殖，促進植物生長，從而提高植物的存活率。植物內(nèi)生放線菌也因此受到各國微生物學(xué)家，生態(tài)學(xué)家，農(nóng)業(yè)專家們的青睞。其產(chǎn)生的活性物質(zhì)可廣泛應(yīng)用于制藥業(yè),農(nóng)業(yè),化工業(yè)，畜牧業(yè)等行業(yè)。石竹，

2、又稱瞿麥，在中國被用作藥用植物已有近千年的歷史。石竹能合成多種活性天然物質(zhì)。目前石竹內(nèi)生放線菌的研究還尚屬空白。因此研究石竹內(nèi)生放線菌意義非凡。
　　本實驗致力于調(diào)查中國傳統(tǒng)藥用植物石竹內(nèi)生放線菌多樣性和分布情況，與此同時對其中的內(nèi)生放線菌進行抗病原真菌細菌實驗，對其產(chǎn)活性物質(zhì)潛力進行評估。從四株不同生境條件下的石竹根莖葉部位共分離到64株內(nèi)生放線菌。研究發(fā)現(xiàn)，不同植物組織，不同篩選培養(yǎng)基，分離情況也有所不同。石竹內(nèi)根部內(nèi)生放線菌

3、數(shù)量最多。HV培養(yǎng)基和高氏培養(yǎng)基分離的內(nèi)生放線菌最多。其中21株內(nèi)生放線菌對病原真菌表現(xiàn)出抑制抗性。其中5株內(nèi)生菌對8種以上病原菌表現(xiàn)出活性作用。7株內(nèi)生放線菌的平均抑制率在15％左右。有5株內(nèi)生菌發(fā)酵液對病原細菌表現(xiàn)出抗性作用。在這五種內(nèi)生放線菌中，有三株內(nèi)生放線菌(CY23、CY60、CY64)浸提沉淀物對枯草芽孢桿菌有明顯的抑菌活性，平均抑制率在10％左右。
　　從64株內(nèi)生放線菌中選出形態(tài)較為少見的四株菌(CY10，CY1

4、2，CY13，CY18)，對其進行16sRNA測序分析，測序結(jié)果表明CY10屬于小單孢菌屬(Micromonospora)，CY13是隸屬于鏈孢囊菌屬(Streptosporangium)，CY12和CY18都屬于球孢囊菌屬（Sphaerisporangium)。經(jīng)鑒定NEAU-CY18T為分離自石竹根部的球孢囊菌屬新種，再對其進行多相分類學(xué)鑒定。NEAU-CY18T在氣生菌絲上長有球形光滑的孢子囊，孢子不游動。細胞壁氨基酸成分為內(nèi)消旋

5、-二氨基庚二酸（meso-diaminopimelic acid）。全細胞水解糖為馬杜拉糖(madurose)，半乳糖(galactose)，核糖（ribose），葡萄糖(glucose)，甘露糖（mannose）。磷酸類脂組成為雙磷脂酰甘油(DPG)，磷脂酰甲基乙醇胺(PME)，磷脂磷脂酰乙醇胺(PE)，羥基磷脂酰乙醇胺(OH-PME)，磷脂酰甘油(PG)，磷脂酰甘露糖肌醇(PIM)和未知磷酸類脂(PL)。主要甲基萘醌成分為MK-9(

6、H4)，MK-9(H2)和MK-9(H6)。主要脂肪酸為C17∶010-methyl，iso-C16∶0 andC16∶0。EzTaxon-e網(wǎng)站分析顯示NEAU-CY18T與S.cinnabarinum JCM3291T(98.9％)和S.melleum JCM13064T相似度最高，分別為98.9％和98.3％。最大似然建樹法以97％的閾值支持這一親緣進化關(guān)系，鄰位連接建樹法也支持這種親緣關(guān)系。由于NEAU-CY18T的表型特征與其