雜柑的遺傳多樣性與親緣關(guān)系研究.pdf

1、本研究采用RAPD技術(shù)對(duì)來(lái)源于中國(guó)柑桔研究所和成都蒲江兩地的19個(gè)優(yōu)良雜柑栽培品種進(jìn)行遺傳分析，并選取9個(gè)來(lái)源于中國(guó)柑桔研究所的柑橘屬及近緣屬其他品種為對(duì)照，以期為雜柑種質(zhì)資源收集、保存、鑒定、評(píng)價(jià)、分類以及親緣關(guān)系研究提供參考方法和理論依據(jù)。同時(shí)研究川渝不同栽培地區(qū)優(yōu)良雜柑‘不知火’的遺傳背景及遺傳差異，以期為川渝‘不知火’栽培品種真實(shí)性及防止‘不知火’遺傳變異提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果如下： 1.通過(guò)核酸沉淀外觀觀察、紫外分光光度分

2、析、凝膠電泳檢測(cè)和RAPD-PCR擴(kuò)增反應(yīng)對(duì)柑橘基因組DNA提取的五種方法比較，認(rèn)為SDS法、核DNA法、CTAB法和適合微生物DNA提取的微波法均能有效提取柑橘基因組，而改良微波法不能有效提取柑橘基因組。從PCR擴(kuò)增結(jié)果看，又以微波法提取的雜柑DNA質(zhì)量較高，是完全可以進(jìn)行RAPD擴(kuò)增，并且較其他方法耗時(shí)短、效率高，因此，適合微生物DNA基因組的提取方法(微波法)更適合柑橘基因組的提取。 2.采用常規(guī)的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)法對(duì)雜柑R

3、APD-PCR反應(yīng)的主要成份和參數(shù)進(jìn)行多次優(yōu)化，適合雜柑RAPD擴(kuò)增的最佳反應(yīng)體系為：20μL反應(yīng)體系中含模板DNA25ng，10×buffer2μl，Mg2+2.0mmol/L，引物0.5μmol/L，dNTPs0.22mmol/L，TaqDNA聚合酶1.4U。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，43個(gè)循環(huán)；72℃繼續(xù)延伸10min，4℃保溫。 3.以果實(shí)性狀差異較大的

4、五份材料‘不知火’、‘星路比’、‘朋娜’、晚白柚和枳為試材，在100條RAPD隨機(jī)引物中篩選出16條擴(kuò)增效果較好的引物。16條引物共擴(kuò)增出270條RAPD位點(diǎn)，平均每個(gè)引物16.25個(gè)位點(diǎn)，DNA片段大小為200-4500bp，其中有254條帶具有遺傳多態(tài)性，約占總數(shù)的94.07％；每個(gè)引物檢測(cè)到的RAPD多態(tài)譜帶不等，從7條到22條，平均15.875條。這表明雜柑種質(zhì)個(gè)體間的DNA多態(tài)性是豐富的，因此，采用RAPD標(biāo)記完全能從DNA水

5、平上檢測(cè)到這些種質(zhì)柑橘材料間的差異。 4.19個(gè)雜柑材料被成功區(qū)分為兩類，其中10份雜柑(‘天草’、‘不知火’、‘清峰’、‘津之香’、‘陽(yáng)香’‘默科特’、‘諾瓦’、‘日輝’、‘愛(ài)媛14號(hào)’)被聚為寬皮柑橘類，9份雜柑(‘有明’、‘明尼奧拉’、‘星路比’葡萄柚、‘火焰’葡萄柚、‘紅肉’葡萄柚、‘黃果柑’、‘勝山伊予柑’、‘宮內(nèi)伊予柑’、‘卡里佐’)和橙類柚類聚為另一類。都未被聚為枳類。 5.在16個(gè)RAPD引物在28個(gè)雜柑

6、及對(duì)照柑桔屬及近緣屬品種中檢測(cè)到只存在與枳及枳的后代中的一條特異性條帶，該條帶由引物104(GTGACGTAGG)擴(kuò)增出來(lái)，為1519bp。在后來(lái)的進(jìn)一步試驗(yàn)中證實(shí)了這條特異性帶僅存在枳及其雜種中，目前已對(duì)其進(jìn)行成功測(cè)序，國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道，其功能還有待進(jìn)一步研究。 6.對(duì)川渝不同地區(qū)栽培的‘不知火’的RAPD-PCR擴(kuò)增結(jié)果表明不同渠道引進(jìn)的‘不知火’分為兩大類，從中國(guó)柑橘研究所引種的聚為一類，從華中農(nóng)業(yè)大學(xué)引種的則聚為另一類。