基于iTRAQ技術對奶牛金黃色葡萄球菌人工誘導型乳腺炎差異表達蛋白質(zhì)分析.pdf

1、乳腺炎是奶牛場造成奶生產(chǎn)下降和巨大經(jīng)濟損失的一種復雜的奶牛疾病，嚴重地危害了奶牛業(yè)的健康發(fā)展，而金黃色葡萄球菌型乳腺炎是最嚴重的一種，治療成本大且難以治愈。目前仍未找到徹底解決的方法。
　　本研究利用金黃色葡萄球菌構建中國荷斯坦奶牛乳腺炎疾病模型，采用iTRAQ技術結合液質(zhì)聯(lián)用技術，篩選與奶牛金黃色葡萄球菌型乳腺炎密切相關的差異表達蛋白，并進行相關的GO和Pathway等功能分析，從而得到與奶牛乳腺炎相關的新型生物標記分子，以期初

2、步從蛋白質(zhì)水平揭示奶牛乳腺炎的免疫調(diào)控機制。主要結果如下:
　　1.本實驗成功的建立了奶牛臨床型金黃色葡萄球菌型乳腺炎疾病模型，感染后奶牛所表現(xiàn)的臨床癥狀及各項指標的檢測（SCC，BMT等）結果，真實地反映了金黃色葡萄球菌誘導奶牛乳腺炎的發(fā)病過程。
　　2.iTRAQ技術分析共篩選到168個差異蛋白（Fold change≥1.5或者≤0.667，P＜0.05），其中66個在金葡菌組表達上調(diào)，102個表達下調(diào)。生物信息學分析

3、發(fā)現(xiàn)有30個差異蛋白與乳腺組織的防御，免疫和炎癥反應有關。
　　3.差異蛋白的GO富集分析發(fā)現(xiàn)，這些蛋白顯著富集到314條GO Term中(P＜0.05)。
　　4.結合KEGG數(shù)據(jù)庫對差異表達蛋白進行Pathway富集分析，篩選到20條與防御，免疫和炎癥相關的通路。主要有:FC小量RI信號通路、MAPK信號通路、NF-κB信號通路、B細胞受體信號轉(zhuǎn)導通路、鈣信號通路、Toll樣受體信號通路、自然殺傷細胞介導的細胞毒作用、血

4、管內(nèi)皮生長因子信號轉(zhuǎn)導通路、白細胞跨內(nèi)皮遷移、造血細胞譜系、腸道免疫網(wǎng)絡的IgA生產(chǎn)、趨化因子信號通路、磷脂酰肌醇信號系統(tǒng)、細胞質(zhì)DNA的檢測途徑、FcγR-介導的吞噬作用、補體及凝血級聯(lián)反應、T細胞受體信號轉(zhuǎn)導途徑、RIG-I樣受體信號通路、NOD樣受體信號通路、抗原加工和呈遞。進一步對這些Pathway進行網(wǎng)絡圖分析，發(fā)現(xiàn)了12個樞紐蛋白:預測:血小板堿性蛋白、間α胰蛋白酶抑制物重鏈H3前體(IHIH3)、熱休克蛋白β-1(HSPB

5、1)、熱休克70KDa蛋白1A(HSPA1A)、核因子NF-k-B P105亞基(NFKB1)、脂多糖結合蛋白(LBP)、Ras相關C3肉毒素底2前體(RAC2)、預測:copine-3亞型X1、isochcrismatase結構域蛋白1(ISOC1)、未鑒定的蛋白Loc524810前體(LOC524810)、整合素a-M前體(ITGAM)、整合素β-2前體(ITGB2)?？梢猿醪綄⑦@些關鍵蛋白作為乳腺炎抗性選擇的候選蛋白進行深入的研究