豬體外受精胚早期發(fā)育過程中退行性變化的研究.pdf

1、在豬上，體外生產(chǎn)胚胎一直為囊胚發(fā)育率低、胚胎質(zhì)量低的問題所困擾。早期胚胎發(fā)育過程中伴隨著大量發(fā)育異常的細(xì)胞，尤其在體外培養(yǎng)過程中更為普遍。研究表明，早期胚胎中普遍存在凋亡現(xiàn)象，即使是形態(tài)正常的胚胎當(dāng)中也存在凋亡細(xì)胞。胚胎細(xì)胞中出現(xiàn)高比例的凋亡對胚胎的生長是不利的，而早期胚胎的體外死亡又是制約哺乳動物胚胎生物技術(shù)發(fā)展的重要因素。隨著胚胎生物技術(shù)的發(fā)展，囊胚前死亡越來越引起人們的關(guān)注，早期胚胎死亡的增加也是相關(guān)動物繁殖新技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)的最大

2、障礙。通過對牛和豬胚胎的觀察發(fā)現(xiàn)，在早期胚胎的培養(yǎng)過程中，隨著培養(yǎng)時間的延長，胚胎會出現(xiàn)發(fā)育阻滯、卵裂球破碎、胞質(zhì)不均勻、透明帶軟化等現(xiàn)象，有相當(dāng)一部分胚胎發(fā)生退化，進而死亡。本實驗通過對豬體外受精胚胎早期發(fā)育過程中的形態(tài)學(xué)變化、核相變化及DNA損傷等情況的研究，以期建立其與卵裂、發(fā)育能力間的聯(lián)系；通過分析胚胎形態(tài)異常與退化的關(guān)系，了解胚胎退化死亡的實質(zhì)；通過豬胚胎早期發(fā)育過程中正常與異常胚胎發(fā)生的比率，凋亡胚胎與形態(tài)異常胚胎的比例，建

3、立凋亡與豬胚胎發(fā)育不良間的關(guān)系，為克服早期胚胎退化死亡，提高胚胎體外發(fā)育率提供實驗依據(jù)。本實驗所獲結(jié)果如下： 1、早期胚胎在體外培養(yǎng)過程中會發(fā)生退化。退化死亡胚胎的比例隨培養(yǎng)時間延長逐漸上升，但總體上表現(xiàn)為培養(yǎng)早期相對平穩(wěn)，第3d、第4d、第5d的死亡率分別為3.6％，5.7％和9.6％，培養(yǎng)6、7d時死亡率似乎突然增加，分別達45.6％(21/46)和55,7％(44/79)。 2、早期胚胎在體外發(fā)育過程中，呈現(xiàn)退化的

4、形態(tài)學(xué)變化，包括發(fā)育速度減慢，胞質(zhì)碎片增多等等。從胚胎發(fā)育速率上看，培養(yǎng)3d的胚胎正常發(fā)育的比例較高，為59.1％(39/66)，培養(yǎng)5、6d的胚胎普遍發(fā)生發(fā)育延遲，其正常發(fā)育的胚胎比例僅為5.3％(5/94)和7.7％(5/65)。隨著體外培養(yǎng)時間的延長，無胞質(zhì)碎片的胚胎比例逐漸減少，并且胚胎的碎片含量也有所增加，培養(yǎng)3d的胚胎碎片含量都<20％，而培養(yǎng)6d時碎片含量>20％的胚胎數(shù)可占到13.8％。 3、胚胎第3d的發(fā)育速率

5、、胞質(zhì)碎片含量、碎片類型與胚胎的后期發(fā)育能力關(guān)系緊密。本實驗參照人胚胎評分標(biāo)準(zhǔn)，首次建立豬胚胎質(zhì)量評分標(biāo)準(zhǔn)(3項指標(biāo)各20分，滿分60分)。按此標(biāo)準(zhǔn)，高分值胚胎的發(fā)育潛能高于低分值胚胎。綜合評分中分值46-60的胚胎桑椹胚、囊胚發(fā)育率為32.8％，明顯高于分值30-45的胚胎(10.4％，P<0.05)。 4、IVF胚胎發(fā)生退化時，胚細(xì)胞核發(fā)生凝聚、斷裂，DNA產(chǎn)生損傷、斷裂，彗星電泳表現(xiàn)出不同程度的凋亡形態(tài)。核相分析表明，培養(yǎng)