復(fù)方半邊蓮抑菌機制及飲片有效期的研究.pdf

1、本論文共分為三章。第一章主要從堿性磷酸酶(AKP)、電導(dǎo)率、胞外蛋白含量和SDS-PAGE電泳分析四個方面研究了復(fù)方半邊蓮中木犀草素和黃芩素分別對金黃色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和β-內(nèi)酰胺酶陽性金黃色葡萄球菌(ESBLs-SA)的抑菌機制;第二章采用初均速法研究補骨脂和金銀花的有效期,用經(jīng)典恒溫加速法研究杭白菊和貢菊的有效期;第三章綜述了目前中藥飲片有效期的研究進展。
　　第一章、復(fù)方半邊蓮抑菌機制的

2、研究
　　復(fù)方半邊蓮由半邊蓮、半枝蓮和白花蛇舌草組成,具有抗菌和抗病毒作用。本章從復(fù)方半邊蓮的化合物中進行抗菌活性篩選,最終確定了通過測定AKP的含量變化、電導(dǎo)率變化、胞外蛋白含量變化和SDS-PAGE電泳分析研究木犀草素和黃芩素對SA、MRSA和ESBLs-SA的抑菌機制來探討復(fù)方半邊蓮的抑菌機制。
　　采用紙片擴散法(K-B)測定了木犀草素和黃芩素的抑菌圈和最低抑菌濃度(MIC)值;液體培養(yǎng)法測定了木犀草素和黃芩素的半數(shù)

3、抑制濃度(IC50)。結(jié)果顯示,木犀草素在濃度為10mg/mL時對SA(抑菌圈為17mm,MIC=0.078mg/mL)的抑制作用略強于MRSA和ESBLs-SA(抑菌圈為16mm,MIC=0.156mg/mL);IC50顯示,木犀草素對SA、MRSA和ESBLs-SA的抗菌活性分別為0.17±0.05mg/mL、0.26±0.09mg/mL和0.39±0.04mg/mL。黃芩素在濃度為10mg/mL時對SA和MRSA(抑菌圈為12mm

4、, MIC=0.313mg/mL)的抑制作用略強于ESBLs-SA(抑菌圈為11mm,MIC=0.625mg/mL);IC50顯示,黃芩素對SA、MRSA和ESBLs-SA的抗菌活性分別為0.35±0.05mg/mL、0.42±0.06mg/mL和1.08±0.10mg/mL。
　　抑菌機制的研究結(jié)果顯示,經(jīng)木犀草素和黃芩素作用后,SA、MRSA和ESBLs-SA的AKP、電導(dǎo)率及胞外蛋白含量均增大,SDS-PAGE電泳圖顯示蛋白

5、譜帶也明顯發(fā)生變化,說明木犀草素和黃芩素可能破壞了細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu),導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性增加,進而使細(xì)胞內(nèi)容物外泄;同時推測木犀草素和黃芩素對細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成有一定影響,使菌體內(nèi)蛋白質(zhì)減少,影響和阻礙細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的表達,最終導(dǎo)致細(xì)菌正常生理功能受損或喪失。
　　第二章、中藥飲片有效期的研究
　　本章采用初均速法預(yù)測補骨脂和金銀花的有效期,采用經(jīng)典恒溫加速法預(yù)測杭白菊和貢菊的有效期。
　　建立HPLC法,測定補骨脂中

6、補骨脂素和異補骨脂素的含量,并分別進行了方法驗證學(xué)考察,以補骨脂素和異補骨脂素總含量為指標(biāo),采用初均速法測得補骨脂在25℃下有效期為0.53年。結(jié)果顯示補骨脂需室溫保存。
　　建立HPLC法,測定金銀花中綠原酸含量,并進行了方法驗證學(xué)考察,以綠原酸為指標(biāo),采用初均速法測得金銀花在25℃下有效期為1.29年。結(jié)果顯示金銀花需室溫保存。
　　建立了HPLC法,測綠原酸、木犀草苷和3,5-O-雙咖啡?；鼘幩嵩诤及拙蘸拓暰罩械暮?/p>