半邊蓮提取物L(fēng)OB抗心肌缺血再灌注作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一章半邊蓮提取物L(fēng)OB對離體心臟缺血再灌注損傷的影響
　　目的:采用Langendorff體外心臟缺血再灌注模型，觀察LOB對離體心臟缺血再灌注損傷的影響。
　　方法:將60只大鼠隨機(jī)分對照組，模型組，陽性藥(維拉帕米20μg/L)組，LOB低、中、高濃度(100，300，1000μg/L)組。在Langendorff體外心臟缺血再灌注模型上，觀察各組左室收縮壓(LVSP)，左室內(nèi)壓最大變化速率(±dp/dtmax)，心率

2、(HR)及冠脈流量(CF)，并測定冠脈流出液中的肌酸激酶(CK)與乳酸脫氫酶(LDH)含量變化。
　　結(jié)果:與模型組比較，3個濃度的LOB均能明顯升高離體大鼠心臟LVSP，±dp/dtmax，同時減慢HR，增加CF，以上作用均呈一定的濃度依賴性。模型組復(fù)灌后冠脈流出液中的CK，LDH水平明顯升高，而3個濃度的LOB呈濃度依賴性抑制CK，LDH的升高。
　　結(jié)論:LOB具有抗心肌缺血再灌注損傷作用，其作用可能與改善血流動力學(xué)、

3、減少心肌耗氧量及穩(wěn)定心肌細(xì)胞膜有關(guān)。
　　第二章半邊蓮提取物L(fēng)OB抗心肌缺血再灌注損傷的在體研究
　　目的:采用冠狀動脈結(jié)扎法建立大鼠心肌缺血再灌注損傷動物模型，觀察半邊蓮提取物L(fēng)OB對心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，并初步研究其機(jī)制。
　　方法:采用冠狀動脈結(jié)扎法建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，動態(tài)觀察大鼠的心電情況，并分別于動脈結(jié)扎前10min舌下靜脈注射5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg LOB，設(shè)立陽性

4、對照組和假手術(shù)對照組。實驗結(jié)束后，取血檢測LDH、IL-6的水平，取心肌組織測定梗死面積，病理學(xué)觀察其形態(tài)學(xué)變化，并檢測心肌組織勻漿中MDA的含量。
　　結(jié)果:正常空白對照組心肌組織均無梗死;假手術(shù)組對心肌組織無顯著影響;缺血再灌注模型組心肌組織切片可見部分梗死區(qū)，為總面積的32.1±3.5％;而在缺血前10min舌下靜脈分別注射不同劑量的LOB能不同程度的降低缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的心肌梗死面積，其中中、高劑量組與模型組比較有顯著性

5、差異。病理切片HE染色顯示，正常組心肌組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，細(xì)胞形態(tài)、大小規(guī)則，未見細(xì)胞凋亡、壞死;缺血再灌注模型組大鼠心肌組織結(jié)構(gòu)紊亂，心肌細(xì)胞片狀壞死。在缺血前10min前分別連續(xù)舌下靜脈注射3個劑量的LOB(5、10和20mg/kg)能不同程度地減輕上述缺血再灌注誘導(dǎo)的大鼠心肌組織病理學(xué)改變。心肌缺血再灌注損傷后，血中LDH、IL-6活性顯著升高，與正常對照組比較具有顯著性差異。在心肌缺血再灌注損傷前分別舌下靜脈注射3個劑量的LOB

6、(5、10和20mg/kg)能不同程度地減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的LDH活性升高。同時，心肌缺血再灌注損傷后心肌組織中MDA含量升高，與正常對照組比較具有顯著性差異。心肌缺血再灌注損傷前分別連續(xù)灌胃給予注射3個劑量的LOB（5、10和20mg/kg）能不同程度地減輕大鼠心肌缺血再灌注損傷誘導(dǎo)的心肌組織勻漿MDA含量升高。
　　結(jié)論:成功建立了大鼠缺血再灌注模型，并初步證實了半邊蓮提取物L(fēng)OB具有保護(hù)心肌損傷的作用，可能與減少

7、LDH、IL-6及MDA的釋放等因素有關(guān)。
　　第三章半邊蓮提取物L(fēng)OB抗心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制研究
　　目的:建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型，觀察LOB對心肌損傷的保護(hù)作用，并對其可能的機(jī)制作初步探討。
　　方法:正常培養(yǎng)H9C2(2-1)心肌細(xì)胞，并建立心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型。加入不同濃度的LOB(10-6 M、3×10-6 M、10-5 M)1h后，進(jìn)行心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷，作為實驗組;設(shè)立正常對照組、陽性對

8、照組。用MTT法檢測各組細(xì)胞的存活率;分別用LDH、IL-6、MDA檢測試劑盒檢測LDH、IL-6、MDA的水平;用TUNEL法檢測各組細(xì)胞的凋亡情況;用caspase-3檢測試劑盒檢測caspase-3的活性;同時，用RT-PCR法檢測各組IL-6 mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:缺氧復(fù)氧損傷后，心肌細(xì)胞存活率顯著降低，與正常對照組比較具有顯著性差異，3個濃度的LOB均能不同程度地減少缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞存活率降低;缺氧復(fù)

9、氧損傷后，心肌細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性及MDA含量顯著升高，與正常對照組比較具有顯著性差異。在缺氧復(fù)氧損傷前1h分別加入3個濃度的LOB（10-6、3×10-6和10-5M）能不同程度地減輕缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的LDH活性、MDA含量的升高。我們分別檢測了心肌細(xì)胞及培養(yǎng)液中IL-6 mRNA和IL-6的水平，發(fā)現(xiàn)在缺氧復(fù)氧損傷后，IL-6 mRNA和IL-6水平均顯著升高，與正常對照組比較具有顯著性差異。在缺氧復(fù)氧損傷前1h分別加入3個濃度的

10、LOB（10-6、3×10-6和10-5 M）能不同程度地減輕缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的IL-6 mRNA和IL-6水平的升高。通過TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡情況，并檢測caspase-3的活性，發(fā)現(xiàn)缺氧復(fù)氧損傷后，心肌細(xì)胞凋亡率及caspase-3活性顯著降低，與正常對照組比較具有顯著性差異。在缺氧復(fù)氧損傷前1h分別加入3個濃度的LOB（10-6、3×10-6和10-5 M）能不同程度地減少缺氧復(fù)氧損傷誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡及caspase-3活性