黑線倉鼠ESR與季節(jié)性繁殖的關(guān)聯(lián)性探究.pdf

1、黑線倉鼠（Cricetulus barabensis）是我國北方農(nóng)田的優(yōu)勢害鼠之一，以其分布廣，繁殖力強，種群數(shù)量大，給人們的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和日常生活帶來嚴重危害。受溫度、光照、食物等多種因素的影響，黑線倉鼠的繁殖行為存在季節(jié)性，每年的春季和秋季是其種群數(shù)量增長的高峰期。雌激素是主要的性激素，通過與其受體的結(jié)合調(diào)控動物的繁殖，但具體調(diào)控的分子機制尚不清楚。雌激素受體（Etrogen receptor，ESR）是核受體超家族的一員，分為兩個亞型

2、ESRα和ESRβ。ESRs不僅參與動物下丘腦-垂體-性腺軸的繁殖活動調(diào)控，而且參與和繁殖密切相關(guān)的脂肪代謝、血糖代謝、攝食等能量代謝及機體的應激反應。本研究通過檢測黑線倉鼠體內(nèi)ESRα和ESRβ在不同季節(jié)、不同器官中的差異表達，為研究ESRα和ESRβ的生物功能及其分子調(diào)控機制奠定基礎(chǔ)，為研究黑線倉鼠的季節(jié)性繁殖調(diào)控機制提供科學依據(jù)，為鼠害的防治提供理論依據(jù)。
　　首先，用RT-PCR方法克隆黑線倉鼠ESRα和ESRβ的cDNA

3、序列，研究得到黑線倉鼠ESRα序列1017 bp，全部為編碼區(qū)，Genbank登陸號：KC345615；ESRβ的cDNA序列896 bp，全部為編碼區(qū)，Genbank登錄號：KF267446。運用生物軟件分別對二者的序列結(jié)構(gòu)分析，發(fā)現(xiàn)ESRα存在14個磷酸化位點，ESRβ存在13個磷酸化位點，在二者的A/B功能區(qū)磷酸化位點存在差異，ESRα具有4個連續(xù)的絲氨酸磷酸化位點，而ESRβ則不具有這一結(jié)構(gòu)，推測這跟兩種受體在機體內(nèi)的生理功能不

4、同有關(guān)。二級結(jié)構(gòu)預測發(fā)現(xiàn)ESRα和ESRβ都含有較多的α螺旋和Turn轉(zhuǎn)角Coil卷曲螺旋，都具有較強的親水性。構(gòu)建ESRα和ESRβ的分子系統(tǒng)進化樹結(jié)果顯示二者都是與同是嚙齒類的大鼠、小鼠最先聚為一類,其次是與靈長類的人和狒狒以及偶蹄目的綿羊、牛和野豬聚為一類，最后與原雞和三文魚聚類，二者的分子系統(tǒng)進化樹結(jié)果與傳統(tǒng)的分類結(jié)果相一致，顯示ESRα和ESRβ功能的重要性和進化的相對保守性。
　　其次，本研究采用實時熒光定量方法檢測E

5、SRα和ESRβ在黑線倉鼠不同組織的表達差異。結(jié)果顯示：ESRα在子宮、卵巢、腎上腺、下丘腦、附睪的相對表達量高，ESRβ在卵巢、子宮、下丘腦、大腦、睪丸中相對表達量較高，二者在脾臟中的相對表達量都較低。對兩種雌激素受體在同一組織的相對表達量分析發(fā)現(xiàn)，在雌性黑線倉鼠體內(nèi)ESRα在下丘腦、腎上腺和子宮的相對表達量極顯著高于ESRβ（P<0.01），ESRβ只在卵巢的表達量高于ESRα，二者差異不顯著。在雄性黑線倉鼠體內(nèi)，對比兩種受體在同一

6、組織的相對表達量，ESRβ在睪丸中的表達量顯著高于ESRα(P<0.05)；在附睪、腎上腺、腎臟中ESRα的表達量高于ESRβ，在腎臟中二者的相對表達量存在極顯著差異(P<0.01)；在下丘腦和大腦中，二者的差異不顯著。
　　最后，用實時熒光定量PCR的方法檢測ESRα和ESRβ在不同季節(jié)黑線倉鼠體內(nèi)不同組織的差異表達。結(jié)果顯示：在雌性下丘腦中，ESRα的表達量有冬季>夏季>春季>秋季，冬季表達量與其他三個季節(jié)存在極顯著差異（P<

7、0.01）；ES Rβ的表達量有冬季>夏季>秋季>春季，冬季表達量與春季和秋季的表達量有極顯著差異(P<0.01)；不同季節(jié)的雌性下丘腦中，ESRα的相對表達量都高于ESRβ的表達量，冬季二者的表達有極顯著差異（P<0.01）。在雄性下丘腦中，ESRα的相對表達有秋季>冬季>夏季>春季，ESRβ的相對表達沒有季節(jié)性差異；不同季節(jié)的雄性下丘腦中，ESRβ的相對表達量都高于ESRα的表達量。在卵巢中，ESRα的相對表達量有春季>夏季>秋季>

8、冬季，冬季與春季的相對表達量有顯著差異（P<0.05）；ESRβ在卵巢中的相對表達量有冬季>秋季>春季>夏季，冬季和秋季的相對表量有極顯著差異（P<0.01）；不同季節(jié)的卵巢中，ESRβ的相對表達量都高于ESRα的表達量，二者的相對表達在春季存在極顯著差異（P<0.01），在夏季和秋季有顯著差異(P<0.05)。在睪丸中，ESRα的相對表達量有冬季>夏季>春季>秋季，冬季的相對表達量與春季和秋季的相對表達量有極顯著差異（P<0.01），