甲狀腺乳頭狀癌差異表達(dá)microRNAs的篩選及其功能初步研究.pdf

1、目的：MicroRNAs(miRNAs)是一類在植物、動(dòng)物和病毒中廣泛存在的非編碼小分子RNA,長(zhǎng)約21-23nt,高度保守,與特定mRNA3'-UTR結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。成熟的miRNAs與其他蛋白質(zhì)一起組成RISC(RNA InducedSilencing Complex),通過結(jié)合到靶基因mRNA的3'-UTR,從而引起靶mRNA的降解或者翻譯抑制。miRNAs參與調(diào)控許多重要的生物學(xué)過程,在腫瘤形成過程中起著重要作

2、用。
　　 甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)是最常見的一種內(nèi)分泌惡性腫瘤,約占甲狀腺癌的80％,發(fā)病率逐年上升,已躍居女性惡性腫瘤第8位,嚴(yán)重威脅人類的生命健康,是內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。然而,甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病機(jī)制至今仍不明確,進(jìn)一步探索其發(fā)病機(jī)制對(duì)提高診斷和治療有著十分重要的意義。
　　 本研究應(yīng)用microarray芯片技術(shù)篩選甲狀腺乳頭狀癌miRNAs的

3、差異性表達(dá),發(fā)現(xiàn)與甲狀腺乳頭狀癌相關(guān)的miRNAs,并探討其與甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,為進(jìn)一步研究甲狀腺乳頭狀癌的分子發(fā)病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)和研究依據(jù)。
　　 方法：3例甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本選自2010年6月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院甲狀腺外科手術(shù)治療的患者,分別提取RNA,應(yīng)用μParafloTM微流體芯片對(duì)其進(jìn)行分析,初步建立起甲狀腺乳頭狀癌miRNAs的差異表達(dá)譜,對(duì)差異表達(dá)的miRNAs進(jìn)行分析;通過TaqMan Micro

4、RNAAssays進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證microarray芯片結(jié)果;運(yùn)用靶基因預(yù)測(cè)軟件對(duì)甲狀腺乳頭狀癌中顯著差異的miR-146b-5p和miR-7進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè),同時(shí)對(duì)所預(yù)測(cè)的靶基因進(jìn)行分子生物學(xué)功能分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.相對(duì)于癌旁組織,在甲狀腺乳頭狀癌組織中篩選出38個(gè)表達(dá)上調(diào)的miRNAs,其中顯著上調(diào)(log21＞1)的為:miR-146b-5p、miR-221、miR-222、miR-34a、m

5、iR-375、miR-31、miR-181a-2*、miR-21、miR-181c、miR-146b-3p、miR-181a、miR-1260b、miR-182、miR-1281、miR-22*;而表達(dá)下調(diào)的miRNAs有26個(gè),其中顯著下調(diào)(log2≤-1)的為:miR-7、miR-204、miR-486-5p、miR-335、miR-7-2*、miR-3149、miR-374b、miR-126、miR-130a、miR-99a、mi

6、R-150、miR-338-5p、miR-100、miR-3115(p＜0.05)。
　　 2.為驗(yàn)證microarray芯片結(jié)果,我們挑選顯著差異表達(dá)的miR-21和miR-181c進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR,以RNU48作為內(nèi)參基因,相對(duì)于癌旁組織,miR-21的上調(diào)倍數(shù)為3.81,miR-181c的上調(diào)倍數(shù)為1.34。
　　 3.通過靶基因預(yù)測(cè)軟件,miR-146b-5p篩選出80個(gè)靶基因,miR-7篩選出129個(gè)靶基

7、因。
　　 4.對(duì)靶基因分析后發(fā)現(xiàn),許多靶基因參與了細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及血管生成等,其中有些靶基因參與了多個(gè)生物學(xué)過程。
　　 結(jié)論：
　　 1.初步建立起甲狀腺乳頭狀癌的miRNAs表達(dá)譜,相對(duì)于癌旁組織,15個(gè)miRNAs在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)水平顯著上調(diào),14個(gè)miRNAs的表達(dá)水平顯著下調(diào),這些異常表達(dá)的miRNAs可能和甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)病密切相關(guān)。
　　 2.