不同種源凹葉厚樸TRAP分析及苗期種源初選.pdf

1、文章結(jié)合均勻試驗與正交試驗，建立了適用于凹葉厚樸的目標區(qū)域擴增多態(tài)性-聚合酶鏈式反應(yīng)（TRAP-PCR）體系。采用所得TRAP優(yōu)化體系對全國凹葉厚樸主產(chǎn)區(qū)的16個不同種源凹葉厚樸展開研究，構(gòu)建了各種源凹葉厚樸TRAP指紋鑒定圖譜并進一步對遺傳多樣性及親緣關(guān)系進行分析。根據(jù)苗期監(jiān)測值，對12個種源凹葉厚樸苗期主要性狀進行分析，篩選出了凹葉厚樸優(yōu)良種源。研究主要得到如下結(jié)論：
　　一、16種源凹葉厚樸TRAP分析
　　1、適用于

2、凹葉厚樸的25μL TRAP-PCR反應(yīng)體系為：模板DNA40ng，Mg2+1.5mmol·L-1，dNTPs0.28mmol·L-1，固定引物及隨機引物0.3μmol·L-1，TaqDNA聚合酶0.75U。PCR擴增程序：94℃預(yù)變性5min；94℃變性1min，40℃復(fù)性1min，72℃延伸1min，5個循環(huán)；將退火溫度升至50℃，其它條件不變進行38個循環(huán)；72℃延伸10min。
　　2、從72對TRAP引物中篩選出16對引

3、物對16個種源凹葉厚樸進行 TRAP擴增。共檢測出清晰、穩(wěn)定、重復(fù)性好的位點180個，多態(tài)性位點146個，多態(tài)性比率平均達81.1％。每個引物對檢測片段數(shù)在7～15之間，平均11.25個片段。擴增結(jié)果表明凹葉厚樸種源間多態(tài)性豐富。
　　3、篩選出的16對TRAP引物對每對擴增出的多態(tài)性條帶在4～13條之間，平均每對可擴增出9.13條；各引物對擴增譜帶類型為7～16類，平均為13類。TRAP技術(shù)具有較強的種質(zhì)資源鑒別能力。采用Lea

4、fy/Em1、GAI1/Em8、psbA-trnH/Em6、Leafy/Em4、Leafy/Em6、Leafy/Em9、psbA-trnH/Em5、rbcL/Em4以及rbcL/Em8共9個TRAP引物對構(gòu)建了16個凹葉厚樸種源的數(shù)字化身份證驗碼。
　　4、Popgene32軟件對16個凹葉厚樸種源的TRAP遺傳多樣性及親緣關(guān)系分析：觀測等位基因數(shù)Na為1.8111，有效等位基因數(shù)Ne為1.4950，基因遺傳多樣性指數(shù)h為0.28

5、73，香農(nóng)信息指數(shù)I為0.4290，總基因多樣性Ht為0.2873。遺傳相似度在0.5611-0.8389之間，平均為0.6935；遺傳距離在0.1757-0.5778之間，平均為0.3702。凹葉厚樸種源間遺傳多樣性豐富，具有較大的遺傳差異。福建永安（WFJya）種源和福建屏南（WFJpn）種源之間親緣關(guān)系最近；福建明溪（WFJmx）種源和安徽合肥（WAHhf）種源之間親緣關(guān)系最遠。
　　5、UPGMA聚類法基于種源間TRAP遺

6、傳距離進行聚類。聚類結(jié)果：在遺傳距離0.3714處可將參試的16個凹葉厚樸種源分為三類。第一類：WSCpzh、WAHhf、WHByc、WJSnj、WJSlyg、WHNxx、WHNdx以及 WSXxa；第二類:WFJsc；第三類：WFJya、WFJpn、WFJmx、WJXda、WJXls、WHBns以及WSCmy。遺傳差異分析若僅依據(jù)地理起源進行，結(jié)果并非十分可靠。
　　二、12種源凹葉厚樸苗期試驗
　　1、凹葉厚樸苗高值在種

7、源間及月份間差異水平均達到極顯著。江蘇連云港（WJSlyg）、湖北宜昌（WHByc）、安徽合肥（WAHhf）、河南新縣（WHNxx）、湖北恩施（WHBns）、陜西西安（WSXxa）6個種源苗高生長勢較好。最好為江蘇連云港（WJSlyg）種源，其次為湖北宜昌（WHByc）種源；最差為江西德安（WJXda）種源，其次為江西廬山（WJXls）種源。在6月份與7月份之間苗高生長較為緩慢，生長多集中在7-9月份之間，9月份之后生長速度減緩。種源間

8、苗高性狀差異主要由自身遺傳因素引起，苗高值作為評價指標進行苗期選優(yōu)可靠性大。
　　2、凹葉厚樸地徑值在種源間及月份間差異水平均達到極顯著。湖北宜昌（WHByc）、湖北恩施（WHBns）、江蘇連云港（WJSlyg）、四川綿陽（WSCmy）4個種源地徑生長勢較好。最好為湖北宜昌（WHByc）種源，其次為湖北恩施（WHBns）種源；最差為江西德安（WJXda）種源，其次為江西廬山（WJXls）種源。在6月份與7月份之間地徑生長較為緩慢，

9、從7月份開始加快生長。凹葉厚樸地徑生長期相對苗高生長期較長。地徑性狀差異主要由自身遺傳因素引起，地徑值作為評價指標進行苗期選優(yōu)可靠性大。地徑與苗高二者相比，采用苗高作為種源間苗期選優(yōu)指標更為可靠。
　　3、凹葉厚樸苗高、地徑與地理氣候因子間相關(guān)關(guān)系：苗高與經(jīng)度、緯度、年日照呈正相關(guān)，與年均溫、無霜期呈負相關(guān)，相關(guān)關(guān)系均不顯著。其中南北分布對凹葉厚樸苗高的影響較大。地徑與經(jīng)度、年均溫、年將水、年日照及無霜期呈負相關(guān)，與緯度呈正相關(guān)，

10、相關(guān)均不顯著。地徑東西變異較苗高明顯。
　　4、凹葉厚樸苗高、地徑與生物量間相關(guān)關(guān)系：苗高與地上鮮重、地下鮮重、總鮮重、地上干重、地下干重以及總干重間呈極顯著正相關(guān)，與根冠比呈弱正相關(guān)，與幼苗含水率呈弱負相關(guān)。地徑與地上鮮重、地下鮮重、總鮮重、地上干重、地下干重以及總干重間呈極顯著正相關(guān)，與根冠比呈弱正相關(guān)，與幼苗含水率呈顯著負相關(guān)。
　　5、凹葉厚樸苗期生物量，種源間各生物量指標值存在明顯差異。凹葉厚樸苗木生物量與各地理氣

11、候因子間相關(guān)關(guān)系均未達到顯著水平，其地理變異模式與苗高、地徑地理變異模式具有極大相似性。
　　6、凹葉厚樸苗期葉片葉綠素相對含量（SPAD值）：種源間葉片葉綠素相對含量（SPAD值）差異主要由遺傳因素引起，差異極顯著。葉片葉綠素相對含量與各生物量指標間的相關(guān)關(guān)系均不顯著，對生物量并無顯著影響。
　　7、基于苗高、地徑聚類分析結(jié)果，12個參試凹葉厚樸種源可劃分為四類。第一類：江西德安（WJXda）、江西廬山（WJXls）及福建

12、順昌（WFJsc）；第二類：江蘇南京（WJSnj）、安徽合肥（WAHhf）、河南新縣（WHNxx）、陜西西安（WSXxa）及四川攀枝花（WSCpzh）；第三類：四川綿陽（WSCmy）；第四類：湖北宜昌（WHByc）、江蘇連云港（WJSlyg）及湖北恩施（WHBns）。初步篩選出3個優(yōu)良凹葉厚樸種源：湖北宜昌（WHByc）、江蘇連云港（WJSlyg）及湖北恩施（WHBns）；3個較差凹葉厚樸種源：江西德安（WJXda）、江西廬山（WJXl