副豬嗜血桿菌的分離鑒定及生物學特性研究.pdf

1、分類號密級UDC編號碩士學位論文副豬嗜血桿菌的分離鑒定及生物學特性研究學位申請人：王樂指導教師：鄧雯教授趙戰(zhàn)勤副教授學科專業(yè)：業(yè)：基礎獸醫(yī)學學位類別：別：農(nóng)學2014年05月摘要論文題目：論文題目：副豬嗜血桿菌的分離鑒定及生物學特性研究副豬嗜血桿菌的分離鑒定及生物學特性研究專業(yè)：業(yè)：基礎獸醫(yī)學礎獸醫(yī)學研究生：生：王樂王樂指導教師：指導教師：鄧雯鄧雯教授教授趙戰(zhàn)勤趙戰(zhàn)勤副教授教授摘要近年來，副豬嗜血桿菌病在我國廣泛流行并致病。本研究采用病

2、原菌的形態(tài)學觀察、生化鑒定和PCR鑒定，從我國河南等省份有疑似副豬嗜血桿菌臨床癥狀的137個病例中分離鑒定出57株副豬嗜血桿菌。不同組織部位的分離結(jié)果表明，副豬嗜血桿菌在肺臟分離率最高，達到39.7%；其次是心血（27.9%）、腦（17.4%）、關節(jié)（14.3%）、淋巴結(jié)（8.8%）；脾臟的分離率最低（5.3%）。57株副豬嗜血桿菌的KRG瓊脂擴散血清分型結(jié)果表明，在我國河南及其周邊省份以血清4型（13株，占22.8%）和5型（12株，

3、占21.1%）最為流行，其次為12型（6株，占10.5%）、13型（6株，占10.5%）和14型（5株，占8.8%），而1型（2株）、2型（1株）、6型（1株）、10型（1株）均較少。另外有10株（17.5%）的菌株不能進行分型。小鼠毒力試驗結(jié)果表明，毒力最強的是血清12型和14型，其次是5型和4型，毒力最弱的是13型。本研究將篩選的副豬嗜血桿菌5種血清型中毒力最強的菌株，包括血清4型4株、5型4株、12型3株、13型2株和14型3株，

4、共16株細菌作為研究對象進行進一步研究。對前期篩選的16株副豬嗜血桿菌進一步進行了豚鼠毒力試驗，結(jié)果表明16株副豬嗜血桿菌候選疫苗菌株的豚鼠毒力試驗結(jié)果與小鼠毒力試驗結(jié)果基本一致。但攻毒豚鼠具有更長的發(fā)病死亡周期，且具有與豬相似的病理變化，更適合作為豬的替代實驗動物。不同感染劑量對仔豬的毒力試驗結(jié)果表明，同一血清型的不同兩株細菌的毒力相近，對仔豬的致死劑量分別為S4S1株，6.8109CFU；S4S2株，7.2109CFU；S5S2株，

5、4.4109CFU；S5S3株，3.7109CFU；S12S2株，3.9109CFU；S12S3株，3.0109CFU。生長曲線測定結(jié)果顯示，副豬嗜血桿菌血清4型S4S1株，血清5型S5S3株和血清12型S12S3株在液體培養(yǎng)基中菌量分別在第10h，12h，14h時達到峰值，分別為2.5109CFUmL，1.6109CFUmL和1.1109CFUmL。對3株副豬嗜血桿菌16SrRNA基因PCR產(chǎn)物進行序列測定，發(fā)現(xiàn)與3株候選疫苗菌株16