廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌的分離鑒定及動物感染試驗研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，Hps）常引起豬的多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎和腦膜炎，是豬格氏病（Glasser’s disease）的病原菌，隨著我國規(guī)模化養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，該病已成為豬場保育仔豬和青年豬死亡的重要原因之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，然而，到目前為止，其毒力因子和致病機制仍不十分清楚，血清型的多樣性及很大比例不能分型菌株影響了對具有高效交叉保護力疫苗的研究，本文從副豬嗜血桿菌的分離鑒定，豚鼠感染試驗，毒

2、力篩選和仔豬感染試驗四個方面進行系統(tǒng)研究。
　　 1.廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌分離鑒定
　　 2007年9月份～2008年9月份對廣東地區(qū)37個患病豬場送檢的372份病料進行副豬嗜血桿菌分離鑒定，通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析顯示，PCR擴增陽性病料52份，而實際分離副豬嗜血桿菌的病料數(shù)39份，實際分離率10.48％（39/372），低于PCR檢出率13.98％（52/372）；將其中的30株副豬嗜血桿菌進行血清分型，分型結(jié)果顯示廣東地區(qū)

3、流行的血清型主要為血清5型（23.3％，7/30），12型（16.7％，5/30）；其次是4型（13.3％，4/30），14型（10.0％，3/30）；另外還有33.3％（10/30）的分離株未定型；從37個發(fā)病豬場中，共檢測出副豬嗜血桿菌陽性豬場15個，副豬嗜血桿菌感染豬場陽性率達40.54％，表明副豬嗜血桿菌病在廣東地區(qū)已普遍流行。
　　 2.副豬嗜血桿菌人工感染豚鼠模型的初步建立
　　 用副豬嗜血桿菌血清5型標準菌

4、株HS80（腦炎型）經(jīng)不同接種途徑（腹腔、鼻腔、肺內(nèi)）感染200～250g健康普通級白化豚鼠，活菌含量為6×109CFU，每組5只，試驗表明豚鼠對副豬嗜血桿菌較易感，在12～36h之間就能造成豚鼠的急性死亡；以腹腔接種途徑感染的豚鼠發(fā)病率（100％）和死亡率（80％）最高，所以選擇腹腔注射為最佳接種途徑；發(fā)病的豚鼠表現(xiàn)出典型呼吸困難、震顫等臨床癥狀和病理變化，從感染死亡的豚鼠大腦及全身各實質(zhì)器官均可分離到該病原菌，與仔豬感染情況相似。這

5、一動物模型的建立為進一步研究副豬嗜血桿菌的致病機理和毒力奠定基礎。
　　 3.廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌血清4型、5型和12型分離株對豚鼠毒力試驗
　　 利用寇氏法，以200～250g普通級白化豚鼠為動物模型，以腹腔接種途徑，對廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌分離株血清4型、5型、12型菌株進行半數(shù)致死量（LD50）測定，結(jié)果顯示血清4型H43菌株、血清5型H10菌株、血清12型H27菌株的半數(shù)致死量分別是1.58x109CFU、1.75

6、x109CFU、1.68×109CFU。根據(jù)以上三個血清型代表菌株LD50測定結(jié)果，將分離的副豬嗜血桿菌血清4型、5型、12型菌株進行毒力試驗，結(jié)果顯示同一血清型的不同分離株毒力差異顯著，血清4型H25、5型H45、12型H31所致死的豚鼠數(shù)量最多，說明這三株細菌的毒力較同型其它菌株強。本研究結(jié)果為副豬嗜血桿菌疫苗菌株的篩選提供了一定的參考依據(jù)。
　　 4.廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌臨床分離株對斷奶仔豬致病性
　　 將篩選出來

7、的6株副豬嗜血桿菌分離株以腹腔接種途徑感染6周齡HPs抗體陰性健康斷奶仔豬，感染活菌含量為7×109CFU，接種劑量3mL，結(jié)果均可復制出格式病臨床癥狀，并且可以造成一定的死亡率，發(fā)病仔豬表現(xiàn)為體溫一過性升高甚至發(fā)燒、精神不振、側(cè)臥、被毛粗亂、食欲下降、呼吸困難、關節(jié)腫大；病理剖檢變化為纖維素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、肺炎、腦炎和關節(jié)積液；病理組織學表現(xiàn)為肺臟、心臟、脾臟等器官含有大量炎性細胞的纖維蛋白性滲出物。血清5型分離株對仔豬的發(fā)