副豬嗜血桿菌的分離鑒定及其MLST分型研究以及aroA基因自殺性質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf

1、副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，Hps)是引起Glasser病的病原菌，主要引起豬的多發(fā)性漿膜炎、心包炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎、支氣管炎和敗血癥等。該菌是一種NAD依賴、不運動的革蘭氏陰性細小桿菌，屬于巴斯德菌科(Pastteurellaceae)嗜血桿菌屬(Haemophilus)。隨著我國規(guī)模化豬場的發(fā)展，Glasser病有著愈發(fā)嚴重的趨勢，已成為很多豬場保育仔豬發(fā)病率和死亡率提高的重要原因之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成嚴重損

2、失。
　　 本研究主要分3部分進行:
　　 1.為了檢測Hps在廣東省各地區(qū)的感染情況，并對發(fā)病豬場的疫情進行治療和控制，本研究從廣東12個地區(qū)的14個規(guī)?；i場中，于疑似患有Glasser病的豬體內(nèi)分離病料，帶回實驗室后采用劃線接種TSA固體培養(yǎng)基(NAD+)方法分離病原菌，并觀察菌落形態(tài)、菌體形態(tài)、染色特性等方面的基本特征，最終通過PCR擴增16SrRNA的方法鑒定出17株Hps，并采用KRG血清分型的方法對這17個

3、分離株進行血清分型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)廣東采樣的這10個地區(qū)的規(guī)模化豬場中普遍存在著Hps的感染和流行。血清分型研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)廣東地區(qū)流行的優(yōu)勢血清型為5型，共有8株，占菌株總數(shù)的47.0％;位于第二位的是血清型8型，共有5株，占總菌株數(shù)的29.4％。值得注意的是，以往的文獻都報道8型為無毒株，而本試驗中所有的分離株都來自于有Glasser病臨床癥狀的豬體內(nèi)的病變組織，因此本研究中分離到的血清8型菌株是否具有毒力需進一步研究證實。
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4、.對廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌的21個分離株進行了MLST基因分型研究，結(jié)果顯示，廣東地區(qū)副豬嗜血桿菌的7個看家都有不同程度的變異，其中6pgd變異率最高，達到了100％，7個基因的平均變異率為52.4％，每個菌也都產(chǎn)生了新的ST型，變異率為77.3％?；虻钠骄嚯x為0.732，IA值為0.824，與以往的研究結(jié)果比較一致。對21株菌的等位基因型和ST型以及Hps MLST數(shù)據(jù)庫中公布的116個ST型菌株進行BURST分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這21

5、株菌被分成了10個類群，有幾株菌與遠在歐洲和美洲的分離株都有親緣關(guān)系，甚至分離于同一個豬場同一頭豬的分離株，基因型都存在差異，證明副豬嗜血桿菌不僅流行廣泛，變異率也很高。最后對這21個菌株的MLST基因型和血清型進行了比較，結(jié)果顯示該菌的MLST基因型和血清型沒有直接的對應(yīng)關(guān)系。
　　 3.副豬嗜血桿菌有15個血清型，不同血清型之間交叉保護力較差，而被強毒株感染后康復的豬只卻能獲得針對大部分血清型Hps的抵抗力。為了保留強毒株較