副豬嗜血桿菌多位點序列分型及其密度感應信號分子初步鑒定.pdf

1、副豬嗜血桿菌（HPS）是豬格拉澤氏病的病原菌，可以引起多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎和腦膜炎，給豬群造成較高的發(fā)病率與死亡率。雖然目前血清分型鑒定了副豬嗜血桿菌的15個血清型，但仍然存在大量的不可分型菌株，這極大地限制了流行病學及種群結構分析，有必要通過MLST等基因分型方法對我國副豬嗜血桿菌進行分類。
　　細菌生物被膜是造成副豬嗜血桿菌定植及耐藥的主要原因，密度感應系統(tǒng)調控生物被膜的形成，可能與副豬嗜血桿菌的致病機制相關，而目前尚未有對于

2、副豬嗜血桿菌密度感應系統(tǒng)的報道，故對副豬嗜血桿菌密度感應系統(tǒng)信號分子的研究有助于揭示該菌的致病機制。
　　本研究對50株副豬嗜血桿菌田間分離株和15株參考株進行了MLST分型，共發(fā)現了26個新的等位基因序列和29個新的ST型，這極大地豐富了副豬嗜血桿菌MLST數據庫。BURST分析表明副豬嗜血桿菌缺乏穩(wěn)定的種群結構，具有較高異質性；ST型與地理位置之間也不存在關聯(lián)。UPGMA系統(tǒng)發(fā)育樹將所有的菌株分為兩大組，A組和B組，存在于A組

3、的菌株所屬的血清型基本為無毒或弱毒，B組趨向于強毒菌株。
　　利用密度感應系統(tǒng)Ⅰ型信號分子報告菌CV026和KYC55，對生物被膜形成能力較強的副豬嗜血桿菌田間分離株H19是否產生AHL類信號分子進行了定性檢測，進而利用HPLC-MS-MS對副豬嗜血桿菌H19培養(yǎng)上清中存在的Ⅰ型信號分子進行鑒定，發(fā)現副豬嗜血桿菌所合成的Ⅰ型信號分子共有兩種，其相對分子質量與C10-HSL和C12-HSL相同，但結構不同，由于確定其結構需要進行大量

4、提取純化，而H19產生的信號分子量極少，因此未能對其結構作進一步鑒定。兒茶酸具有抑制密度感應機制的作用，兒茶酸對副豬嗜血桿菌生物被膜形成的試驗結果表明，兒茶酸使副豬嗜血桿菌H19生物被膜形成能力降低25.4％。
　　利用自殺質粒pK18mobsacB通過同源重組方法，成功構建了副豬嗜血桿菌H19的ΔRbsB基因缺失突變株及其回復株，并進行了生物被膜形成能力檢測，發(fā)現ΔRbsB基因缺失突變株生物被膜形成能力降低，而回復株生物被膜形成