副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星野生型折點(diǎn)和藥效學(xué)折點(diǎn)研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌可以引起豬的格拉澤氏病，表現(xiàn)為纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎和肺炎，發(fā)病特點(diǎn)多呈現(xiàn)地域特征，給全球的養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。替米考星作為大環(huán)內(nèi)酯類動(dòng)物專用藥，對(duì)畜禽的呼吸道疾病具有很好的治療作用。替米考星吸收速度快，半衰期長，肺部濃度高等藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn)，進(jìn)一步促進(jìn)了其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用。但我國目前養(yǎng)殖業(yè)用藥的不合理必然導(dǎo)致耐藥現(xiàn)象的產(chǎn)生，耐藥監(jiān)測(cè)具有必要性和緊迫性。而耐藥監(jiān)測(cè)需要判定標(biāo)準(zhǔn)，目前我國并沒有相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，主要參考

2、CLSI中的折點(diǎn)，CLSI標(biāo)準(zhǔn)中并沒有替米考星對(duì)副豬嗜血桿菌的折點(diǎn)規(guī)定。因此，為了監(jiān)測(cè)耐藥性產(chǎn)生，分析耐藥現(xiàn)狀和發(fā)展規(guī)律，更科學(xué)地指導(dǎo)臨床用藥和新藥開發(fā)，本課題參考CLSI中折點(diǎn)制定的方法建立了符合我國國情的野生型折點(diǎn)和藥效學(xué)折點(diǎn)，為折點(diǎn)的制定工作提供科學(xué)數(shù)據(jù)。
　　1替米考星對(duì)副豬嗜血桿菌野生型折點(diǎn)的制定
　　使用PCR方法對(duì)收集的103株副豬嗜血桿菌進(jìn)行鑒定，結(jié)果全部呈現(xiàn)陽性，證明細(xì)菌全部為副豬嗜血桿菌。使用CLSI推薦

3、的瓊脂稀釋法對(duì)103株副豬嗜血桿菌進(jìn)行MIC測(cè)定，MIC50為1μg/mL，MIC90為4μg/mL。
　　將測(cè)得的MIC數(shù)據(jù)進(jìn)行以二為底的對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化，并使用Sigmastat軟件進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，結(jié)果P值為0.200，符合正態(tài)分布。使用Graphpad prism軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性回歸擬合，當(dāng)模擬值N≤16時(shí)，模擬值與真值相差0株菌，差異最小。使用NORMINV函數(shù)分別設(shè)定野生型上限的概率為99.9％和下限的概率為0.1％，得到野

4、生型分布范圍為0.015μg/mL～16μg/mL。使用NORMDIST函數(shù)分別求出高于野生型上限的概率為0.18％，和低于野生型下限的概率為0.07％。根據(jù)規(guī)定，野生型折點(diǎn)為野生型分布的上限，所以制定野生型折點(diǎn)為16μg/mL。
　　2、替米考星對(duì)副豬嗜血桿菌的作用特點(diǎn)
　　根據(jù)副豬嗜血桿菌SH0165株MIC的測(cè)定結(jié)果，分別設(shè)定1/4MIC、1/2MIC、1MIC、2 MIC、4 MIC、8 MIC、32 MIC濃度的藥

5、物與細(xì)菌進(jìn)行孵育，分別在0h、1h、2h、4h、8h、12h、24 h各取0.1mL，使用稀釋法進(jìn)行涂板計(jì)數(shù)。在36h對(duì)平板活菌數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)，以活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)作圖，結(jié)果表明替米考星對(duì)副豬嗜血桿菌的作用呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　3、替米考星在豬血漿和肺部的藥動(dòng)學(xué)研究
　　將12頭健康仔豬平均分成兩組，一組用來建立血漿藥動(dòng)模型，一組用來建立肺部藥動(dòng)模型，給藥劑量都為40 mg/kg，給藥方式為灌胃給藥。

6、　　血漿藥動(dòng)組:分別在0.25 h、0.5 h、0.75 h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24 h、36h、48 h、72 h、96 h采集血液2 mL，根據(jù)建立的高效液相檢測(cè)方法檢測(cè)血漿中藥物濃度。使用Winnonlin軟件對(duì)獲得的藥時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，采用的是有吸收的二室開放模型，得到的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù):AUC24=32.10μg·h/mL，Tmax=3.50 h，Cmax=1.73μg/mL。
　　肺部藥動(dòng)組:根據(jù)

7、制定的麻醉方案將動(dòng)物麻醉，在給藥前分別采集血液2mL，給藥后分別在0.5 h、2h、4h、6h、8h、12h、24 h、36h、48 h、72 h、96 h通過肺泡灌洗技術(shù)注入50 mL生理鹽水，并回收肺泡灌洗液，根據(jù)建立的高效液相檢測(cè)方法檢測(cè)灌洗液中藥物濃度。另外檢測(cè)灌洗液和血漿中尿素氮的濃度，結(jié)果表明，藥物經(jīng)過了約10倍稀釋。使用Winnonlin軟件對(duì)獲得的藥時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，采用的是非房室模型，得到的主要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù):AUC24=

8、72.59μg·h/mL，Tmax=48 h，Cmax=4.72μg/mL。
　　4、替米考星藥效學(xué)折點(diǎn)的建立
　　根據(jù)肺部藥動(dòng)獲得的6頭豬的AUC24數(shù)據(jù):47.17μg·h/mL、93.76μg·h/mL、69.06μg·h/mL、75.57μg·h/mL、63.46μg· h/mL、86.50μg·h/mL。分別計(jì)算平均值為72.59μg·h/mL，標(biāo)準(zhǔn)差為16.69μg·h/mL。根據(jù)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)符合對(duì)數(shù)正態(tài)分布，使用

9、Crystalball軟件進(jìn)行蒙特卡洛模擬，得出10000頭份的AUC數(shù)據(jù)。將藥效學(xué)目標(biāo)設(shè)定為30h，分別計(jì)算不同MIC下AUC/MIC的達(dá)標(biāo)率，當(dāng)MIC為1μg/mL時(shí)，達(dá)標(biāo)率為100％，當(dāng)MIC為2μg/mL時(shí)，達(dá)標(biāo)率為76％，根據(jù)規(guī)定，達(dá)標(biāo)率不小于90％的最大MIC即為藥效學(xué)折點(diǎn)，所以制定替米考星對(duì)副豬嗜血桿菌的藥效學(xué)折點(diǎn)為1μg/mL。
　　綜上所述，本課題建立了副豬嗜血桿菌對(duì)替米考星的野生型折點(diǎn)。完善了動(dòng)物肺泡灌洗技術(shù)，