副豬嗜血桿菌TbpA蛋白對(duì)仔豬免疫保護(hù)力的研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）是豬上呼吸道的一種常在菌，是豬革拉斯氏病（Glasser's disease）的病原菌。近年來(lái)由HPS引起的以豬纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎、呼吸困難、高熱及高死亡率為特征的傳染性疾病呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。該病已成為影響全球養(yǎng)豬業(yè)最為嚴(yán)重的細(xì)菌性傳染病之一，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了一定的經(jīng)濟(jì)損失。在控制副豬嗜血桿菌病方面，通常采用藥物防治和疫苗接種等。然而長(zhǎng)期大量使用抗菌藥物，

2、促使HPS的耐藥譜逐漸拓寬，多重耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重；同時(shí)HPS血清型眾多，各型菌株間的毒力及致病性差異都很大，且相互之間缺乏有效的交叉保護(hù)力，致使HPS滅活疫苗的保護(hù)效果十分有限。前期的研究結(jié)果顯示，HPS轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白（TbpA）不僅具有良好的免疫活性，而且對(duì)豚鼠具有良好的免疫保護(hù)及交叉免疫保護(hù)效力。本研究利用重組TbpA蛋白和血清型13型HPS全菌體滅活苗免疫仔豬，通過(guò)檢測(cè)免疫后仔豬的HPS抗體水平和細(xì)胞因子（IL-5、IL-10、IF

3、N-γ、TNF-α）水平，觀察攻毒后仔豬的采食量、直腸溫度、精神狀態(tài)及死亡率，并進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，旨在探討TbpA蛋白對(duì)仔豬的免疫保護(hù)作用，為HPS新型亞單位疫苗的研究及副豬嗜血桿菌病的防控提供科學(xué)依據(jù)。
　　首先，選取15頭42日齡左右HPS抗體陰性健康大白仔豬，通過(guò)Reed-Muench法測(cè)定13型HPS的半數(shù)致死量。其次，選取25頭14日齡左右HPS抗體陰性健康大白仔豬，隨機(jī)分為5組（編號(hào)為A、B、C、D、E），每組5頭。

4、A、B兩組注射TbpA，劑量分別為2mg、1mg；C組注射13型HPS全菌體滅活苗1mL；D組和E組注射PBS1mL；佐劑均為弗氏佐劑，接種方法均為頸部肌肉注射。共免疫3次，免疫間隔時(shí)間均為14天。一免和二免14天后、三免10天后分別采集仔豬血液，分離血清。應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)HPS抗體水平和細(xì)胞因子（IL-5、IL-10、IFN-γ、TNF-α）水平。三免10天后用HPS血清型13型菌株以7LD50劑量對(duì)仔豬進(jìn)行腹腔攻毒，測(cè)定其免疫

5、保護(hù)性，并對(duì)每組仔豬的肺臟和脾臟進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。
　　結(jié)果顯示，一免后，TbpA免疫組、全菌體滅活苗免疫組HPS抗體水平和細(xì)胞因子水平相對(duì)于對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）；二免后，TbpA免疫組HPS抗體水平和細(xì)胞因子水平相對(duì)于對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05），而全菌體滅活苗免疫組HPS抗體水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)；三免后，TbpA免疫組、全菌體滅活苗免疫組的HPS抗體水平和細(xì)胞因子水平都顯著高于對(duì)照組(P＜0.0

6、5)，且TbpA免疫組HPS抗體水平顯著高于二免抗體水平(P＜0.05)。三免后第10天以HPS血清型13型菌株7LD50劑量分別對(duì)A、B、C、D這4組仔豬腹腔攻毒后，A、C組仔豬存活率為100％，B組仔豬存活率為40%，D組仔豬存活率為0%。A、C、E組仔豬和B組存活的仔豬肺臟和脾臟組織樣品的病理學(xué)損傷程度與D組和B組死亡的仔豬差異明顯。結(jié)果表明，HPS的TbpA蛋白對(duì)仔豬能夠產(chǎn)生免疫保護(hù)力，其中2mg免疫劑量、免疫3次，與全菌體滅活