副豬嗜血桿菌菌影(Ghost)的制備及其免疫效力評價.pdf

1、副豬嗜血桿菌病又稱“革拉瑟氏病”(Gl(a)sser’s disease)是由豬上呼吸道的一種常在機會致治病菌,副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis,Hps)在特定的條件下侵入機體,引起以漿液性、纖維素性多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、呼吸困難、高熱及高死亡率為特征的傳染性疾病。目前,隨著規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,副豬嗜血桿菌病對養(yǎng)豬業(yè)的危害范圍也正在擴大,給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟損失。現(xiàn)在,主要采用滅活疫苗防控此病。通過使用滅活疫苗,

2、可以很好地控制某些血清型的發(fā)病,但由于Hps的血清型較多,且具有明顯的地方性特征,滅活疫苗對不同血清型Hps的交叉保護效果十分有限或者是無效,因此新型疫苗的開發(fā)已經(jīng)成為研究熱點。
　　 菌影(bacterial ghost,BG)是一種不含細胞內(nèi)容物的空胞體,只保留了和活菌一樣的外膜結(jié)構(gòu),免疫原性高,又兼有佐劑的作用。在控制傳染性疾病的研究中,菌影開始受到國內(nèi)外研究者的關(guān)注。為了研制Hps的菌影疫苗,本實驗根據(jù)GenBank中噬

3、菌體PhiX174裂解基因E的編碼序列設(shè)計引物,通過PCR方法擴增溶菌基因E。經(jīng)克隆、鑒定后,將該基因與pBV220載體中的λPL／PR-cI857啟動阻遏系統(tǒng)相串聯(lián),構(gòu)成溫度敏感的溶菌盒E-λPL／PR-cI857。再將含有E基因的溶菌盒亞克隆到pMD18-T載體中,構(gòu)建Hps打孔質(zhì)粒。采用電擊穿孔法將其轉(zhuǎn)入E.coliβ2155中,然后利用接合轉(zhuǎn)移的方式將打孔質(zhì)粒轉(zhuǎn)入Hps血清5型菌株。含有打孔質(zhì)粒的Hps在28℃條件下生長到對數(shù)生

4、長期,然后升溫到42℃誘導(dǎo)E基因的表達,成功制備了Hps菌影。電鏡結(jié)果表明細菌內(nèi)容物被釋放到胞外且菌影形態(tài)完整,本實驗為進一步研發(fā)有效的Hps菌影疫苗和佐劑形式奠定了基礎(chǔ)。
　　 通過動物試驗對制備的Hps菌影疫苗進行免疫效力檢驗。將Hps陰性血清的健康幼齡豬,隨機分為6組,分別用不同的方式接種不同抗原進行免疫:實驗Ⅰ組(菌影疫苗肌肉注射)、實驗Ⅱ組(菌影疫苗滴鼻免疫)、實驗Ⅲ組(加佐劑的菌影疫苗肌肉注射)、實驗Ⅳ組(加佐劑的菌