副豬嗜血桿菌外膜蛋白表型及免疫原性的初步研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌是定居在豬上呼吸道的正常菌群,在特定條件下能引起豬的革拉瑟氏病(Gl(a)sser's disease),該病以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎及高發(fā)病率、高死亡率為特征,給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟(jì)損失。研究副豬嗜血桿菌的流行病學(xué)特性,了解該菌外膜蛋白的差異,揭示毒力因子與毒株之間的關(guān)系,對(duì)于探索致病機(jī)理和為該疾病的免疫預(yù)防提供理論依據(jù)具有重要的理論意義和實(shí)踐意義。
　　 本研究對(duì)分離自江西、廣東和上海三省市的82個(gè)副豬

2、嗜血桿菌野外分離株的外膜蛋白(OMP)進(jìn)行了SDS-PAGE分析,比較了不同臨床背景分離株的OMP表型差異,探討其與毒力的相關(guān)性。采用TotalLab100和Bandscan5.0軟件對(duì)每個(gè)分離株的OMP指紋圖譜進(jìn)行了掃描分析；根據(jù)掃描數(shù)據(jù),采用SPSS16.0軟件進(jìn)行了聚類分析。同時(shí)制備了5株強(qiáng)毒力的野外分離株的多克隆高免血清,通過免疫印跡進(jìn)行了副豬嗜血桿菌OMP與全菌體蛋白的免疫原性試驗(yàn),探討菌株之間的交叉免疫效應(yīng),尋找具有共同抗原

3、決定簇的免疫原性蛋白等研究。主要結(jié)果如下:
　　 1.運(yùn)用十二烷基肌胺酸鈉法成功制備了副豬嗜血桿菌的OMP。
　　 2.利用SDS-PAGE分析技術(shù)對(duì)82個(gè)副豬嗜血桿菌分離株的OMP進(jìn)行分析。綜合直觀分析、聚類分析和免疫學(xué)分析,結(jié)果顯示:副豬嗜血桿菌的OMP表型分為以36～40KD蛋白為特征的PAGEⅡ型和缺乏該特征蛋白的PAGEⅠ型；約34％患病豬分離株屬于PAGEⅡ型,只有約9％健康豬分離株屬于該型,表明36-40K

4、D蛋白可能與毒力相關(guān)。
　　 3.制備的5株副豬嗜血桿菌多克隆高免血清可與同株菌株的OMP起顯著的免疫反應(yīng),主要的反應(yīng)蛋白成分為28～31KD和38～40KD蛋白；同時(shí)與全菌體蛋白的多種成分呈明顯免疫反應(yīng)。
　　 4.5種抗血清對(duì)來自不同臨床背景的分離株具有良好的交叉免疫反應(yīng),但免疫效應(yīng)存在著差異。患病豬分離株的OMP和全菌體蛋白均具有強(qiáng)免疫原性,而健康豬分離株的OMP免疫原性比全菌體蛋白弱。另外,患病豬分離株OMP的免