腦膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白NhhA的克隆表達(dá)及免疫原性分析.pdf

1、腦膜炎奈瑟氏菌（Neisseria meningitidis，Nm）屬奈瑟氏菌屬，革蘭氏陰性菌。由其引起的流行性腦脊髓膜炎發(fā)病快，致死率高，后遺癥嚴(yán)重，尤其對(duì)2歲以下嬰幼兒具有很大危害性。在世界范圍內(nèi)仍是一種具有嚴(yán)重危害性的傳染性疾病。從60年代以來，Nm對(duì)磺胺的耐藥現(xiàn)象日益普遍，因此以疫苗為主的預(yù)防變得尤為重要。莢膜多糖蛋白結(jié)合疫苗對(duì)于預(yù)防A、C、Y、W135群Nm引起的腦脊髓膜炎起到了重要作用[1]。但由于B群腦膜炎奈瑟氏菌（ser

2、ogroup BN.meningitidis，MenB）莢膜多糖與人N-乙酰神經(jīng)氨酸聚合物結(jié)構(gòu)相似[2]，因而不具有免疫原性，所以多糖菌苗的策略并不適用于MenB。因此對(duì)于MenB疫苗研發(fā)來說，外膜蛋白更值得關(guān)注。
　　 本研究從腦膜炎奈瑟菌基因組中克隆得到其外膜蛋白NhhA的基因GNA0992，構(gòu)建pET20b-NhhA重組質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21（DE3）中實(shí)現(xiàn)了可溶性表達(dá)，表達(dá)量約占菌體蛋白總量的20％。表達(dá)蛋白經(jīng)膠回收純

3、化，透析，超濾濃縮后，純度達(dá)90％以上，濃度約1.31ug/ul。Western blot分析結(jié)果顯示重組蛋白具有較好的免疫原性和抗原性。用純化的重組蛋白NhhA免疫BALB/c小鼠，對(duì)其免疫原性進(jìn)行了初步分析。結(jié)果顯示，經(jīng)過三次腹腔免疫，血清IgG滴度達(dá)到23186，同時(shí)殺菌力實(shí)驗(yàn)顯示NhhA能誘導(dǎo)針對(duì)B群腦膜炎奈瑟氏菌的補(bǔ)體依賴的殺菌反應(yīng)。證明了NhhA是一種很好的疫苗候選蛋白。
　　 本研究成功構(gòu)建了Nm外膜蛋白NhhA重