重組B群腦膜炎球菌fHBP融合蛋白的表達(dá)和免疫原性研究.pdf

1、A、C、Y、W135腦膜炎球菌多糖疫苗的使用有效的預(yù)防了細(xì)菌性腦膜炎的發(fā)生[1]。但由于B群腦膜炎奈瑟氏菌(Nesseria Meningitis Group B,MenB)莢膜多糖結(jié)構(gòu)因與人體正在發(fā)育的神經(jīng)組織及少數(shù)成熟組織中的神經(jīng)細(xì)胞黏附分子同源,而不能激發(fā)有效的保護(hù)性免疫[2]。目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)MenB疫苗的研究主要集中于外膜蛋白上,其中位于MenB外膜上的與致病性密切相關(guān)的H因子結(jié)合蛋白(Factor H-binding Prot

2、ein,fHBP),由于其具有較高的保守性成為了最有希望的MenB候選疫苗抗原之一。在補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)中,H因子是補(bǔ)體替代途徑的關(guān)鍵調(diào)節(jié)子,它在因子I介導(dǎo)的Cab裂解為滅活片段iC3b過(guò)程中發(fā)揮輔助因子作用,也能促進(jìn)替代途徑C3轉(zhuǎn)化酶C3bBb的衰變。fHBP和H因子的結(jié)合可下調(diào)替代途徑,從而有利于B群腦膜炎奈瑟菌在機(jī)體內(nèi)的存活。根據(jù)fHBP氨基酸的差異,可以將MenB分為V1、V2、V3三個(gè)fHBP變異型,變異型內(nèi)氨基酸序列高度保守而變異

3、型間差異較大,針對(duì)fHBP的抗體在變異型內(nèi)具有保護(hù)作用[3、4]。分析fHBP氨基酸序列發(fā)現(xiàn),fHBP包含有三個(gè)結(jié)構(gòu)域ABC,A結(jié)構(gòu)域在三個(gè)變型中是一致的,所有V1都表達(dá)的一個(gè)抗原表位位于B結(jié)構(gòu)域,而V2或V3的抗原表位位于C結(jié)構(gòu)域的174—216位氨基酸[5、6],V2與V3174—216位氨基酸序列僅有個(gè)別氨基酸差異[7]。因此,由V1變異型的全長(zhǎng)fHBP和V2變異型C結(jié)構(gòu)域174—216位氨基酸抗原表位組成的融合蛋白理論上有可能能

4、誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)所有MenB的保護(hù)性抗體。
　　 本實(shí)驗(yàn)采用PCR構(gòu)建了編碼B群腦膜炎球菌fHBP蛋白V1變異型全長(zhǎng)序列和V2變異型C結(jié)構(gòu)域具有免疫效應(yīng)抗原表位融合蛋白的基因片段,將此基因片段克隆入pET30a(+)載體后,轉(zhuǎn)化E.coli BL21感受態(tài)細(xì)胞,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE及Western blot鑒定分析,經(jīng)層析純化,獲得的蛋白純度達(dá)到90％以上。融合蛋白免疫小鼠后,分別測(cè)定血清中fHBP特異抗