重組EPO-Fc融合蛋白對恒河猴的長期毒性和免疫原性研究.pdf

1、目的：重組人EPO-Fc是從衍生的CHO培養(yǎng)液中提取，由人EPO、肽接頭和人：IgG Fc段重組形成的融合蛋白，屬于新一代的EPO產(chǎn)品的生物技術(shù)藥物。目前其毒性反應(yīng)和免疫原性尚未見報道。本研究以恒河猴為實驗?zāi)Ｐ停^察EPO-Fc對其主要器官和系統(tǒng)的毒性反應(yīng)，確定其毒性作用的靶器官和損害的可逆性；并通過檢測用藥期間和恢復期血清中抗．EPO-Fc的結(jié)合抗體和中和抗體，判斷該產(chǎn)品免疫原性的強弱，為確定中和抗體對臨床療效的潛在影響提供科學依據(jù)。

2、 方法：恒河猴長期毒性試驗分為EPO-Fc高、中、低三個劑量組(80、25、8μg·kg<'-1>)和一個PBS溶劑對照組，每組6只，雌雄各半。皮下注射給予受試品，每周一次，連續(xù)24周。末次給藥后24小時內(nèi)處死三分之二的動物進行病理解剖和組織學檢查，剩余動物停藥后繼續(xù)觀察8周后處理同上。試驗期間的觀察體征和檢測指標包括：一般生理情況觀察、血液學、血生化、血電解質(zhì)、血流變、心電圖、糞尿、眼底檢查、骨髓檢查，病理組織學、補體、免疫復

3、合物、免疫球蛋白、血清結(jié)合抗體(ELISA橋法)等各項檢測，分別于給藥期及恢復期的不同時點進行。 結(jié)果：動物按中、高劑量給予受試物后，均能引起紅細胞(RBC)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(RET)的明顯上升，并引起相應(yīng)的紅細胞壓積(HCT)和血紅蛋白(HGB)明顯上升，以及血流變指標的改變，表現(xiàn)為高劑量組全血粘度值和全血高切、低切指數(shù)的升高；高、中、低三個劑量組的血沉降低。這些改變與EPO-Fc的藥理學作用有關(guān)。血凝檢查發(fā)現(xiàn)中、高劑量組凝血

4、酶原時間(PT)和活化部分凝血酶時間(APTT)延長；給藥第2周起，低劑量組有1只動物抗體檢測陽性。第5周，低、高劑量各有2只動物呈抗體陽性，至給藥第18周，低、中、高劑量組動物抗體陽性率分別為100％、83％、100％。恢復期，抗體滴度逐漸降低。給藥組動物CD3、CD8、CD20等免疫相關(guān)因子以及補體、免疫復合物和IgG、IgM均未見異常。動物的一般生理狀況、癥狀體征、行為活動、血液生化、電解質(zhì)，糞尿指標、心電圖、骨髓及眼底檢查均未見