重組鉤端螺旋體融合基因疫苗的免疫原性研究.pdf

1、鉤端螺旋體?。ê?jiǎn)稱鉤體病）人獸共患并呈全球分布。我國(guó)是受鉤體病危害十分嚴(yán)重的國(guó)家，目前所使用的鉤體疫苗都具有血清群或型特異性且副作用較大。因此，研制具有廣泛交叉保護(hù)作用、副作用低的新型疫苗是當(dāng)前急需解決的課題。 鉤體病的免疫以體液免疫為主，但也有細(xì)胞免疫的參與。DNA 疫苗是近年發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新型疫苗技術(shù)，它能模擬病原體的自然感染過(guò)程，能有效誘導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫，已有文獻(xiàn)報(bào)道DNA 疫苗在鉤體感染模型中具有較好的免疫保護(hù)作用。

2、本研究主要進(jìn)行以下兩方面的探索：一是改善免疫程序以提高鉤體DNA 疫苗的免疫效力，二是構(gòu)建融合基因以期增加抗原分子的免疫原性，提高免疫效果。 選取鉤體外膜蛋白免疫保護(hù)性或免疫原性較好的四個(gè)基因lipL21,lipL32, lipL41 和ompL1 ，分別構(gòu)建成融合基因lipL21-lipL32 和lipL32-lipL41-ompL1。融合基因分別與真核表達(dá)載體pVAX1 和原核表達(dá)載體pET28b(+)重組并制備其DNA

3、疫苗和蛋白疫苗，按DNA-DNA、DNA-蛋白、蛋白-蛋白三種免疫程序免疫BALB/c 小鼠，檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答的水平，同時(shí)通過(guò)與目前研究認(rèn)為免疫保護(hù)性較好的 lipL32基因進(jìn)行平行比較來(lái)評(píng)價(jià)重組融合基因疫苗的免疫效果。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 DNA疫苗能誘導(dǎo)較強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答，在脾細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及一些細(xì)胞因子的檢測(cè)中，DNA-DNA組、DNA-蛋白組能誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)小鼠產(chǎn)生更強(qiáng)的細(xì)胞免疫反應(yīng)。而 DNA-蛋白組、蛋

4、白-蛋白組在誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，特異性抗體檢測(cè)、顯微凝集試驗(yàn)（MAT） 結(jié)果證明這兩組在誘導(dǎo)小鼠體液免疫反應(yīng)方面與對(duì)照組及 DNA-DNA組都具有顯著差異。由此可見(jiàn)，DNA-蛋白組在誘導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫方面的綜合效果最好，值得進(jìn)一步研究和深化。 在融合基因與 lipL32 基因平行比較疫苗免疫效果時(shí)發(fā)現(xiàn)，lipL32-lipL41-ompL1融合基因疫苗在誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)小鼠體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答時(shí)各指標(biāo)優(yōu)于 lip

5、L32基因或與其相似，而融合基因 lipL21-lipL32的疫苗免疫效果不如 lipL32基因，此結(jié)果顯示 lipL32-lipL41-ompL1融合基因很有可能成為較好的鉤體疫苗候選抗原基因組合。 本實(shí)驗(yàn)首次成功構(gòu)建 lipL32-lipL41-ompL1融合基因，證實(shí)其疫苗免疫效果優(yōu)于 lipL32基因，并證明了 DNA疫苗初次免疫、蛋白疫苗加強(qiáng)免疫策略能誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)小鼠較強(qiáng)的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，為鉤體疫苗的后續(xù)研究打下了基